【*** 使用手冊(cè)】接下來(lái)小編為大家介紹下流式細(xì)胞儀的調(diào)試和使用　　簡(jiǎn)介　　古語(yǔ)說(shuō)：“工欲善其事，必先利其器”。要想很好地應(yīng)用流式細(xì)胞分析和分選技術(shù)，必需先對(duì)儀器進(jìn)行調(diào)試，使其處于良好的工作狀態(tài)，并能正確使用儀器。下面簡(jiǎn)要介紹細(xì)胞計(jì)的調(diào)試項(xiàng)目及要點(diǎn)、使用的程序等等。　　調(diào)試和校準(zhǔn)　　流式細(xì)胞儀在使用前，甚至在使用過(guò)程中都要精心進(jìn)行調(diào)試，以保證工作的可靠性和zui佳性。調(diào)試的項(xiàng)目主要是激光強(qiáng)度、液流速度和測(cè)量區(qū)的光路等?！　〖す鈴?qiáng)度：除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長(zhǎng)的激光出光外，還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強(qiáng)度輸出為zui大。　　液流速度：可通過(guò)操作臺(tái)數(shù)字顯示監(jiān)督，調(diào)節(jié)　氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。　　測(cè)量區(qū)光路調(diào)節(jié)?。哼@是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測(cè)量區(qū)的液流、激光束、90散射測(cè)量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點(diǎn)較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成?！　×魇郊?xì)胞術(shù)中所測(cè)得的量是相對(duì)值，因此需要在使用前或使用中對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定，這樣才能通過(guò)相對(duì)測(cè)量獲得jue對(duì)的意義。因而FCM中的校準(zhǔn)具有雙重功能：儀器的準(zhǔn)直調(diào)整和定量標(biāo)度。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定，有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經(jīng)濟(jì)、容易獲得。常用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品，雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。微球用樹(shù)脂材料制作，或標(biāo)有熒光素，或不標(biāo)記熒光素。所用的雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過(guò)程昭下：取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑：雞血=1：4)，經(jīng)PBS清洗3次，再用5～10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細(xì)胞混合，室溫下振蕩醛化24h，zui后經(jīng)PBS再清洗，貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因?yàn)槲唇?jīng)熒光染色，所測(cè)光信號(hào)為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光?！　x器的操作和使用　?、俅蜷_(kāi)電源，對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)熱；　?、诖蜷_(kāi)氣體閾，調(diào)節(jié)　壓力，獲得適宜的液流速度；開(kāi)啟光源冷卻系統(tǒng)；　　③在樣品管中加入去離子水，沖洗液流的噴嘴系統(tǒng)；　?、芾眯?zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品，調(diào)整儀器，使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上，0和90散射的熒光強(qiáng)度zui強(qiáng)，并要求變異系數(shù)為zui??；　?、葸x定流速、測(cè)量細(xì)胞數(shù)、測(cè)量參數(shù)等，在同樣的工作條件下測(cè)量樣品和對(duì)照樣品；同時(shí)選擇計(jì)算機(jī)屏上數(shù)據(jù)的顯示方式，從而能直觀掌握測(cè)量進(jìn)程；　?、迾悠窚y(cè)量完畢后，再用去離子水沖洗液流系統(tǒng)；　　⑦因?yàn)閷?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)已存入計(jì)算機(jī)硬盤(pán)(有的機(jī)器還備有光盤(pán)系統(tǒng)，存貯量更大)，因此可關(guān)閉氣體、測(cè)量裝置，而單獨(dú)使用計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理；　?、鄬⑺杞Y(jié)果打印出來(lái)。　　操作和使用中的注意事項(xiàng)　　1)光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件，暴露的較強(qiáng)的光線下以后，需要較長(zhǎng)時(shí)間的“暗適應(yīng)”以**或降低部分暗電流本底才能工作；另外還要注意磁屏蔽；　　2)光源不得在短時(shí)間內(nèi)(一般要1h左右)關(guān)上又打開(kāi)；使用光源必須預(yù)熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常；　　3)液流系統(tǒng)必需隨時(shí)保持液流暢通，避免氣泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要經(jīng)過(guò)過(guò)濾、**；　　4)注意根據(jù)測(cè)量對(duì)象的變換選用合適的濾片系統(tǒng)、放大器的類(lèi)型等；　　5)特別強(qiáng)調(diào)每次測(cè)量都需要對(duì)照組。 流式細(xì)胞儀的發(fā)展歷史

　　1、1934年，Moldavan使懸浮的紅細(xì)胞從一個(gè)毛細(xì)玻璃管中流過(guò)，每個(gè)通過(guò)的細(xì)胞可被一個(gè)光電裝置記錄下來(lái)。這就是流式細(xì)胞儀的雛形?！　?、1965年，Kamentsky用紫外吸收和可見(jiàn)光散射兩個(gè)參數(shù)同時(shí)測(cè)量未染色細(xì)胞，給出細(xì)胞中核酸的含量和細(xì)胞大小。奠定了多參數(shù)流式細(xì)胞測(cè)量的基礎(chǔ)?！　?、1967年，Van Dilla和Los Alamos采用了層流流動(dòng)室和氬激光器，開(kāi)發(fā)出了液流束、照明光軸、檢測(cè)系統(tǒng)三者相互垂直的流式細(xì)胞儀。這成為目前各種流式細(xì)胞儀的基礎(chǔ)?！　?、1969年，F(xiàn)ulwyler利用靜電墨水噴射液滴偏轉(zhuǎn)技術(shù)，建立了流式細(xì)胞分選術(shù)。Ehrlich和Wheeless利用飛點(diǎn)掃描技術(shù)和縫掃描技術(shù)使零分辨率的流式細(xì)胞儀變成了低分辨率的流式細(xì)胞儀。　　5、20世紀(jì)70年代，隨著Kohler和Milstein成功提出了單克隆抗體技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)，為特異研究和分析細(xì)胞奠定了良好的基礎(chǔ)?！　?、1973年，美國(guó)BD公司和美國(guó)斯坦福大學(xué)合作，研制開(kāi)發(fā)并生產(chǎn)了世界上**臺(tái)商用流式細(xì)胞儀FACS I。　　7、20世紀(jì)80年代，流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)采集、存儲(chǔ)、顯示、分析日趨完善，隨著樣品制備方法的增加，新的熒光染料和細(xì)胞標(biāo)記物的出現(xiàn)，使流式細(xì)胞儀的應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)大。　　8、20世紀(jì)90年代，與之配套的標(biāo)本制備儀和自動(dòng)進(jìn)樣器的問(wèn)世，以及適合臨床應(yīng)用的單克隆抗體的增加，使流式細(xì)胞儀逐漸從科研單位進(jìn)入醫(yī)院的**實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)科，成為現(xiàn)代化的臨床檢驗(yàn)儀器的一部分。