二手液相色譜儀 島津**液相色譜儀的日常應(yīng)用維護(hù)

一 、島津**掖相色譜儀的日常分析注意事項(xiàng)

　　1.關(guān)于試劑

　　試劑類別：有機(jī)溶劑 無機(jī)化合物 水

　　試劑的要求：(1)有機(jī)溶劑的級(jí)別HPLC以上專用試劑。

　　(2)無機(jī)化合物要求分析純以上。

　　(3) 水要求是去離子純凈水。

　　2.流動(dòng)相

　　要求： (1)無氣泡，通過超聲脫氣，通氦氣等方法進(jìn)行脫氣。

　　(2)純凈無雜質(zhì)，常用方法為用0.45微孔過濾膜進(jìn)行過濾。

　　3. ODS柱的注意事項(xiàng)

　　(1) 壓力 注意每根柱的耐壓(**使用壓力)。

　　(2) PH的范圍 不同柱子的PH值范圍有所不同。

　　(3) 清洗 柱子需要必要的清洗，請(qǐng)用戶參考柱子的說明書。

　　(4) 保存 長時(shí)間不使用柱子時(shí)需要合適的試劑進(jìn)行保存，請(qǐng)參考柱子的說明書。

　　4. 樣品的注入方式及進(jìn)樣量

　　(1)注入方式 在INJ位置將進(jìn)樣針插入，然后再將手柄扳到Load位，在Load位時(shí)將樣品勻速推入定量環(huán)，在從Load位扳到INJ位置即完成進(jìn)樣過程。

　　(2)進(jìn)樣量 對(duì)于20微升定量環(huán)，進(jìn)樣量20微升以下，5微升以上可用微量注射針進(jìn)樣(看刻度)。5微升以下可能回會(huì)造成樣品重復(fù)性變差。20 微升以上(利用定量環(huán))建議用戶注射量為定量環(huán)的3倍以上，即大于60微升。

　　以上建議主要是減少進(jìn)樣誤差，提高重復(fù)性。

　　5. 檢測(cè)器的背壓及各種檢測(cè)池的耐壓

　　(1)紫外檢測(cè)器 耐壓< 30kg/cm2f

　　(2)檢測(cè)器熒光 耐壓< 30kg/cm2f

　　(3)示差檢測(cè)器 耐壓< 30kg/cm2f

　　檢測(cè)器后面加一些背壓主要目的是防止氣泡滯留在檢測(cè)器中。

　　二、**液相色譜的常見故障及排除方式

　　1、 關(guān)于吸濾過濾器堵塞

　　現(xiàn)象： 塞吸現(xiàn)象、管路中不斷產(chǎn)生氣泡

　　處理方式：將吸濾頭1從溶劑管中拔出，放在正己烷

　　或稀硝酸(一般<10%)中超聲清洗。

　　2、 在線過濾器堵

　　現(xiàn)象： 不連接柱子及管路、混合器(松開泵進(jìn)混合器或柱子的管路接頭)，設(shè)定泵流速為1ml/min，泵壓力大于0.3MPa，說明在線過濾器堵。

　　處理方式： 一般建議用戶更換新的過濾器，儀器型號(hào)：LC-10ADVP, LC-10ATVP, LC-20A，LC-20AD, LC-10AT, LC-8A, LC-6AD等可以將在線過濾器拆下，用稀硝酸(濃度小于10%)，進(jìn)行超聲清洗。

　　3、 壓力波動(dòng)的原因及處理方法

　　產(chǎn)生波動(dòng)的原因： 有氣泡

　　密封圈有磨損，產(chǎn)生微量的泄液

　　進(jìn)口單向閥中有異物(較常見)

　　在線過濾器，管路，柱子進(jìn)口處有鹽析出或雜物

　　處理方法： 流動(dòng)相進(jìn)行脫氣，排除流路中的氣泡

　　更換密封圈

　　清洗進(jìn)出口單向閥，將單向閥置于燒杯中，用異丙醇進(jìn)行超聲清洗

　　檢查并清洗過濾器及流路

　　4、 混合器堵及解決方法

　　雙泵高壓梯度系統(tǒng)有高壓混合器，長時(shí)間使用后會(huì)產(chǎn)生不同程度的內(nèi)部過濾器堵。

　　處理方法：

　　(1)先把混合器的預(yù)混合腔整體拆下，再拆下1號(hào)和2號(hào)處。

　　(2)建議用戶不可拆開2號(hào)和3號(hào)之間的連接。

　　(3)取出混合器內(nèi)部的過濾器5-1。

　　(4)將過濾器置于稀硝酸中進(jìn)行超聲清洗。

　　5、引起柱壓升高的原因

　　色譜柱長時(shí)間使用后用戶發(fā)現(xiàn)柱壓比以往要高出許多，造成此情況可能由以下幾個(gè)因素引起。

　　(1) 在線過濾器堵。

　　(2) 高壓混合器堵。

　　(3) 進(jìn)樣器堵。

　　(4) 流路中部分細(xì)管堵。

　　(5) 流通池堵

　　(6) 柱子內(nèi)部吸附樣品產(chǎn)生堵

　　確認(rèn)發(fā)法：進(jìn)行分段檢測(cè)，確認(rèn)的確是柱子壓力高還是以上5點(diǎn)原因中某個(gè)引起的。

　　6、進(jìn)樣峰分叉的原因

　　A) 流路及柱子等沒有做**改變的情況下，分析樣品時(shí)，被檢測(cè)峰產(chǎn)生分叉，則說明保護(hù)柱或分析柱柱效下降，需再生保護(hù)柱或分析柱。

　　B) 柱的出口到檢測(cè)池的管路偏長或管路內(nèi)徑寬所致(常用內(nèi)徑0.3mm以下),導(dǎo)致樣品擴(kuò)散,造成峰分叉。

　　7、 什么情況下需更換D2 Lamp

　　A) 在SPD-10A, SPD-10Avp,SPD-20A上查看參比池的能量，若能量值(REF EN )偏低(220nm時(shí))，一般在400以下，則被認(rèn)為需要更換氘燈。

　　B) 顯示D2 Lamp ERROR時(shí)，一般情況下認(rèn)為氘燈不良需更換。

　　C) 氘燈超過使用時(shí)間(***多2000小時(shí))，需要更換氘燈。

　　8、 造成檢測(cè)池能量低的原因

　　A. 氘燈使用時(shí)間過長(大于2000小時(shí))，燈老化所致

　　B. 光路系統(tǒng)受到污染或老化

　　說明：檢測(cè)池能量高低以參比池為準(zhǔn)。

　　9、 檢測(cè)池中有氣泡如何排除

　　1一般情況下，很小的氣泡會(huì)停留在檢測(cè)池中，所以需要在池管路出口1處加一個(gè)背壓管，池中氣泡不易在池中產(chǎn)生。(加背壓：出口處加上一段阻尼管增加壓力)

　　10、 如何清洗流通池

　　一般情況下，請(qǐng)用戶不要將池拆散，而是用儀器附帶的工具進(jìn)行清洗。 常用流程：水-----甲醇-----異丙醇-----甲醇，或再用稀硝酸沖洗池流路。

　　11、 基線漂移，噪音增大的原因。

　　1、 所用試劑不純

　　2、 整個(gè)流路系統(tǒng)不干凈

　　3、 流動(dòng)池污染

　　4、 氘燈使用時(shí)間過長

　　5、 電壓不穩(wěn)，或者有環(huán)境干擾

　　6、 柱子污染等因素

　　12、 梯度洗脫時(shí)可能產(chǎn)生的干擾峰

　　在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于溶劑的變化，導(dǎo)致吸光度背景值的該改變。所以會(huì)產(chǎn)生基線上下波動(dòng)，這是正?，F(xiàn)象。由于不斷的洗脫。特別是水及無機(jī)鹽混合的流路，流過柱子后部分雜質(zhì)被柱子吸附，隨著體系洗脫液極性的變化，以及在不同的檢測(cè)波長下，某些成分被檢測(cè)，導(dǎo)致在沒有進(jìn)樣情況下，基線上出現(xiàn)峰，即被認(rèn)為干擾峰。

　　13、 ODS柱的再生

　　ODS柱子使用一段時(shí)間后可能會(huì)導(dǎo)致柱效下降，此時(shí)需要對(duì)柱子進(jìn)行再生，提高柱效。

　　1. 甲醇沖洗半小時(shí)

　　2. 三氯甲烷沖洗**鐘

　　3. 異丙醇沖洗**鐘

　　4. 三氯甲烷沖洗**鐘

　　5. 甲醇沖洗半小時(shí)

　　說明：柱使用時(shí)間的長短與被分離的樣品有很大的關(guān)聯(lián)，所以碰到像生物樣品、血制品、發(fā)酵產(chǎn)品等中均含有不同程度的蛋白質(zhì)及大分子量的組分，柱子很容易損壞，柱效易下降。這種情況下用以上方式進(jìn)行再生幾乎沒有明顯的改變。

1、泵正常工作時(shí)，在流動(dòng)相和流速不變的前提下柱壓應(yīng)該是穩(wěn)定的，當(dāng)然在換流動(dòng)相時(shí)壓力變化是正常的，正常情況下如果柱壓升高基本上都是由色譜柱使用時(shí)間長引起的（只有更換色譜柱），如果正常情況下壓力突然降低有可能是（1）接頭處有漏液的地方，采取的方法是有濾紙檢查，如有漏液的地方用扳手?jǐn)Q緊即可。如果沒有漏液則可能是（2）白色的管子里面有氣泡從而導(dǎo)致流動(dòng)相進(jìn)不到泵里面去，采取的方法是排氣泡。排氣時(shí):先STOP停泵--打開排氣閥--按PURGE（快沖）鍵--等氣泡排完后先STOP停泵--擰緊排氣閥，其先后步驟不要搞反了。

2、泵正常工作時(shí)zui高壓力不要超過200KG，所以打開泵以后可以將泵的zui大壓力調(diào)到200KG，這樣如果壓力超過上限則會(huì)自動(dòng)報(bào)警停機(jī)，流速不用超過1ML/MIN，如果使用時(shí)壓力超過200KG，建議將流速調(diào)低點(diǎn)以降低壓力（在色譜柱正常的情況下），如果是因?yàn)樯V柱長時(shí)間使用造成壓力升高則建議更換色譜柱（因?yàn)樯V柱屬于耗材長時(shí)間使用就需要更換，更換的主要依據(jù)色譜柱出峰不正?；蛘咧鶋毫^高）。

3、泵正常工作時(shí)平均每15天左右向注油孔加潤滑油2-3滴。

4、流動(dòng)相里面如果有鹽或酸類，做完實(shí)驗(yàn)后要先用95%二次蒸餾水與5%甲醇洗色譜柱40分鐘左右，然后用純甲醇洗30分鐘左右才可以關(guān)機(jī)。第二天如果繼續(xù)做實(shí)驗(yàn)流動(dòng)相里面仍舊有鹽或酸類，先用95%二次蒸餾水與5%甲醇過渡20分鐘，再用流動(dòng)相。如果流動(dòng)相里面只有甲醇，水，乙腈，做完實(shí)驗(yàn)后就不用95%二次蒸餾水5%甲醇沖洗，可直接用純甲醇洗30分鐘即可關(guān)機(jī)。

5、C18色譜柱的耐酸PH值范圍3-8使用時(shí)不要超出。

6、儀器長期不用時(shí)**要將濾頭泡在甲醇里半月開機(jī)一次，如果開機(jī)時(shí)泵抽不上液可以打開排氣閥按PURGE快沖。

7、調(diào)反壓器時(shí)要注意等液體流出來以后才能調(diào)，一般調(diào)8--10KG，比如現(xiàn)在泵顯示屏顯示柱壓50KG那再增加10KG顯示屏上顯示柱壓60KG然后擰緊鎖緊螺母。

8、關(guān)機(jī)順序：清洗液路時(shí)可以把檢測(cè)器直接關(guān)機(jī)，清洗結(jié)束后先按STOP讓泵停止后再關(guān)電源，不允許直接關(guān)機(jī)

    反相**液相色譜柱是基于溶質(zhì)、極性流動(dòng)相和非極性固定相表面間的疏水效應(yīng)建立的一種色譜模式，**一種有機(jī)分子的結(jié)構(gòu)中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高。

    在**液相色譜中這是應(yīng)用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動(dòng)相多采用酸性的、低離子強(qiáng)度的水溶液，并加**比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機(jī)改性劑，大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少量高聚物微球。

    反相**液相色譜柱的使用和維護(hù)

    在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。

    (1)柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。

    (2)如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。

    (3)避免壓力和溫度的急劇變化及**機(jī)械震動(dòng)。

    溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。

    (4)應(yīng)逐

    漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)?*是水，反之亦然。

    (5)如使用柱溫控制裝置時(shí)，應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。

    (6)一般說來反相**液相色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

    (7)選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

    (8)避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

    (9)經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，**保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。

    (10)保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。**禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間。

    (11)反相**液相色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。

    (12)在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī)，需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。

    在日常分離分析工作中，反相**液相色譜柱的正確使用和維護(hù)**重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。