一套液相色譜系統(tǒng)大致分為以下幾個部分：流動相前處理部分、輸液部分、進樣部分、分離部分、檢測部分?！　∫?、流動相前處理　　流動相前處理主要包括過濾和脫氣，使用設備主要為溶劑過濾器、真空泵和超聲波?！　?、過濾。HPLC所用流動相必須預先過濾和脫氣，過濾的作用是防止顆粒性的雜質堵塞系統(tǒng)，或影響單向閥的正常工作。過濾時需要注意濾膜的選擇，油膜和水系膜必須分開使用。水膜易有機溶劑溶解而進入系統(tǒng)導致泵流路和色譜柱頭的堵塞?！　?、超聲。超聲的作用是去除流動相中的氣泡。超聲時間一般在20min即可。超聲后，液體溫度會升高，應冷卻到室溫再使用。超聲后的流動相若需隔天使用再次超聲?！　《?、輸液系統(tǒng)　　輸液系統(tǒng)即是指高壓恒流泵，其作用是能提供穩(wěn)定準確的流速?！　?、溶劑過濾頭。吸液過濾頭，或稱沉子，主要作用是過濾流動相中可能存在的顆粒性雜質。長時間使用后，雜質有可能阻塞溶劑過濾頭上的過濾板孔隙；或長時間使用緩沖液，過濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜，阻礙流動相正常通過。嚴重時，即使是已超聲過的溶劑，泵吸液時也會有氣泡在四氟輸液管里產(chǎn)生，因此應經(jīng)常對過濾頭進行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理?！　?、單向閥。單向閥的作用是確保液體向一個方向流動，是高壓恒流泵穩(wěn)定輸液的保證。日常使用過程中，可以通過觀察壓力的情況，初步判斷流量是否正常。如果系統(tǒng)已經(jīng)平衡一段時間，壓力應該是穩(wěn)定的。但如果壓力存在波動，則表明流量不穩(wěn)定；如果無壓力，則表明無流量。這兩種情況大多是因為單向閥里混入了氣泡或雜質?；烊霘馀莸那闆r，應把放空閥打開，按沖洗鍵將里面的氣泡排出。單向閥混入雜質的情況，須對其進行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇，安裝時注意標記環(huán)的方向。 單向閥裝配圖及剖面圖 1 帶標記環(huán)閥外套；2 陶瓷座；3 寶石球；4 帶密封墊限位套；5 密封墊　　3、密封圈。密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內的液體泄漏，是保證泵頭輸液正常的關鍵部件。但柱塞桿和柱塞密封圈長期使用會發(fā)生磨損，主要與流量、操作壓力和所使用的流動相有關。當使用含鹽的流動相時，由于脫水或蒸發(fā)，可能形成鹽結晶，而泵運動時鹽結晶會導致密封圈和柱塞桿的磨損。因此，每天實驗前和實驗后都需用純水沖洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二級密封圈之間)，保持清洗管內有水以防止形成晶體，延長柱塞桿和密封圈的使用壽命。 等度系統(tǒng) 梯度系統(tǒng) 柱塞桿清洗連接示意圖　　4、在線過濾器。為了防止由于流動相雜質微粒進入色譜系統(tǒng)，泵在放空閥內安裝了在線過濾器，經(jīng)泵出口流出的液體通過在線過濾器，經(jīng)排空管流出的液體不通過在線過濾器。儀器使用**時間后，建議用戶清洗在線過濾器的燒結不銹鋼過濾片。用扳手卸下壓帽，將密封環(huán)和燒結不銹鋼過濾片一同取出清洗，清洗后按原位裝上。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。　　三、進樣系統(tǒng)　　進樣系統(tǒng)分為手動進樣閥和自動進樣器?！　?、手動進樣閥。對于手動進樣閥使用過程中需要注意每個樣品進樣完成后應對進樣閥進行清洗，防止殘留對下一個樣品分析的影響。還需要注意進樣方式，以20μL定量環(huán)為例，我們可以選擇**充滿定量管或部分充滿定量管。為了保證進樣的重復性，選擇**充滿定量管進樣方式時，需要注入定量環(huán)體積3倍以上的樣品；選擇部分充滿定量管進樣方式時，進樣體積應在定量管體積一半以下，即1-10μL。　　2、自動進樣器。如果采用自動進樣器進樣，首先需要保證注射器里面沒有氣泡存在，否則影響進樣量準確性；其次是樣品瓶里面有足夠的樣品，保證進樣針能夠吸到樣品。為了避免交叉污染需要定期對樣品瓶、蓋和墊進行清洗。若自動進樣器長時間不使用，應該注意：腐蝕性的流動相或洗液(例如，堿性或酸性緩沖溶液)必須**從系統(tǒng)中置換出來。同時，為了避免**的生長，應將一個樣品瓶中充滿甲醇，并重復幾次進樣操作?！　∷?、分離系統(tǒng)　　分離系統(tǒng)包括色譜柱、保護柱以及柱溫箱。　　1、色譜柱。色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細閱讀說明書，了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護方法等事項。色譜柱使用完后，需及時對色譜柱進行沖洗。沖洗完成后，應該將色譜柱從儀器上拆下來，兩端用廠家配的堵頭密封后，保存在色譜柱盒里?！　?、保護柱。保護柱的作用主要是防止吸附性強的雜質對色譜柱污染，從而延長色譜柱的壽命。針對不同型號的色譜柱，應選擇相對應填料的保護柱。應注意柱芯也是有壽命的，應該定期進行更換?！　?、柱溫箱。色譜柱溫度變化，可能會導致保留時間的變化。為了避免這個問題，建議使用柱溫箱?！　∥濉z測系統(tǒng)　　HPLC常用的檢測器是紫外檢測器。在日常使用過程中紫外檢測器主要需要注意檢測池和氘燈的使用與維護?！　?、檢測池。檢測池長時間使用可能會造成污染，如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常，測量能量(SMP ENERGY)偏低，可能為檢測池污染導致，可以對檢測池進行清洗。對檢測池零件的進行清洗，一般先采用約1：4的硝酸溶液超聲清洗，分別用純水和甲醇溶液清洗，然后重新組裝并將檢測池池體推進池腔內，擰緊池板螺絲。注意組裝中，池玻璃及墊片**要放正，以免壓碎池玻璃，造成檢測池泄漏?！　?、氘燈。氘燈正常使用壽命可在1500小時以上。燈的使用壽命與檢測器的使用時間和開啟頻率有關，因此使用過程中應盡量節(jié)省不必要的開機時間，減少開關頻率，以延長氘燈的使用壽命。如果準確地判斷出氘燈已經(jīng)不能點亮或能量太低，則需要更換新的氘燈。在購買氘燈時，應注意咨詢和核對氘燈的型號與儀器型號是否匹配。更換到氘燈時，參照儀器說明書中的相關內容，特別要注意氘燈連接線的位置順序。 液相色譜儀的日常維護與注意事項

　　液相色譜儀的日常維護與注意事項

　　一、日常維護：

　　1.定期清洗單向閥：將單向閥卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲，10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。

　　2.定期清洗吸濾頭：將吸濾頭卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。

　　3.定期沖洗檢測池：把色譜柱卸下，在流速1.0ml/min的狀態(tài)下先用純凈水沖洗30分鐘，然后再用30%

　　磷酸（色譜級）沖洗30分鐘左右，再用超純水沖洗至流出液為中性，***后用甲醇沖洗，待用。

　　二、注意事項：

　　1.開始進樣前30分鐘開氘燈即可，節(jié)約燈的能量和使用時間。

　　2.流動相的使用和注意事項：

　?、偎昧鲃酉啾仨氼A先濾過和脫氣，流動相一般貯存于玻璃不銹鋼容器內。貯存容器**要蓋嚴，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應盡量新鮮配制使用，不要長期貯存。容器應定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質沉淀和可能生長的微生物。

　　②配制流動相用水需為娃哈哈牌純凈水或經(jīng)超聲過濾后的純化水，流動相配制好后先用直徑為5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜，通過沙芯過濾器的過濾，然后在超聲儀上超聲。

　?、鄄坏脤⒀b流動相的容器直接放置與超聲儀內，需放與篩網(wǎng)上進行超聲。

　　3.六通閥的使用和維護注意事項：

　?、贅悠啡芤哼M樣前必須用濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。

　　②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的**壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

　　③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束后應沖洗進樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

　　4.色譜柱柱壓升高的主要因素：

　?、貺C-10AT/20AT/10ATPlus泵的單向閥堵塞。

　?、谏V柱的入口篩板堵塞。

　?、畚鼮V頭堵塞。

　?、躊EEK管接口處堵塞。

　　5.色譜柱柱壓不穩(wěn)的因素：

　?、俦脙扔锌諝?。

　?、诒妹芊鈮|損壞。

　　③溶劑中的氣泡。

　?、芟到y(tǒng)檢漏，找出漏點。

　　6.樣品峰保留時間漂移的主要因素：

　?、偈覂葴囟茸兓^大。

　　②流動相成分發(fā)生變化。

　?、凵V柱未平衡好。

　?、鼙弥杏袣馀?。

　?、菰摿鲃酉嗍欠襁m宜此樣品的檢測。

　　7.基線漂移的主要因素：

　　①柱溫波動。

　　②流動相不均勻。

　?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。

　?、軝z測器出口阻塞。

　?、萘鲃酉嗯浔炔划敾蛄魉僮兓?/p>

　?、蘖鲃酉辔廴?、變質。

　?、呤褂醚h(huán)溶劑。

　　8.檢測器靈敏度不夠的主要因素：

　?、贅悠愤M樣量不足。

　?、诓ㄩL設置不正確。

　?、蹤z測器池窗污染。

　?、軝z測池中有氣泡。

　?、蓦妷翰环€(wěn)。

　?、蘖鲃酉嗔魉俨缓线m。

　　9.色譜柱的使用和維護注意事項：

　?、俦苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓?*機械震動。柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。

　　②應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)?*是水，反之亦然。

　　③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。

　?、苓x擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。

　　⑤避免將復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。

　?、藿?jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，**保留在柱內的雜質。

　　⑦保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。**禁止將緩沖溶液留在柱內靜置至次日或更長時間。

　?、嗌V柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。

　?、嵋怨枘z為基質的填料，只能在pH2~9范圍內使用。每次分析檢測完成后，***好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。

　　10.樣品必須用直徑為2.5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜針式過濾。如有明確要求需用離心過濾的，經(jīng)離心過濾后取上清液即可。