色譜柱是液相色譜儀的核心，在我們使用液相色譜儀的時(shí)候，保證液相色譜柱的柱效，延長色譜柱的使用壽命是很重要的事情，當(dāng)我們使用的時(shí)候色譜柱如果出息壓力過高或者過低等問題都是屬于柱壓問題。液相色譜柱如果壓力過高是因?yàn)橹永锩娈a(chǎn)生了雜質(zhì)，造成液體的流動(dòng)力加大而所造成。下面為大家總結(jié)的幾個(gè)液相色譜柱的問題?！　?、流動(dòng)相的前處理：　　流動(dòng)相或楊平中雜質(zhì)堵塞色譜柱進(jìn)口濾片，導(dǎo)致壓力升高。這是由于流動(dòng)相可能沒有過濾，或過濾不**，使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所致。另一個(gè)方面也可能沒有使用預(yù)保護(hù)柱所致?！　?、樣品的沉淀：　　當(dāng)流動(dòng)相與溶解樣品的溶劑不一致時(shí)，樣品進(jìn)入色譜柱時(shí)，可能因溶解度降低而沉淀出來吸附于柱內(nèi)，造成壓力升高?！　?、晶體的析出：　　使用含有緩沖液的流動(dòng)相時(shí)，緩沖液中的無機(jī)鹽可能會(huì)殘留在體系之中，它們會(huì)因在新流動(dòng)相中的溶解度降低而析出阻塞而壓力升高?！　?、**或霉菌孳生：　　流動(dòng)相中、管路中或柱子進(jìn)口處繁殖、生長霉菌堵塞濾板，導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷酸鹽緩沖液時(shí)一般要現(xiàn)配現(xiàn)用?！　?、溶質(zhì)吸附：　　一些溶質(zhì)在色譜柱上有較強(qiáng)大的吸附力，洗脫時(shí)流動(dòng)相也難以**掉，累積的未洗脫溶質(zhì)也會(huì)造成阻力增大從而造成壓力升高?！　?、流動(dòng)相更換過度較快：　　當(dāng)改變流動(dòng)相體系時(shí)，不**的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動(dòng)相存在于同一個(gè)體系之中，也會(huì)造成壓力升高?！　?、壓力脈沖：　　運(yùn)行過程中，有時(shí)會(huì)產(chǎn)生整個(gè)液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如泵壓力變化，此所形成的壓力脈沖會(huì)造成多孔填料的崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化，填料微屑的長期積累也可能會(huì)使柱床阻力增大，造成壓力升高?！　∫陨蠋追N出現(xiàn)壓升高的原因，下文提出的解決方法：　　處理對(duì)于緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)的情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速?zèng)_洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；如果柱壓還是降不下來，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用?！　?duì)于樣品污染沉積的情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上?！　∫合嗌V柱壓過低的現(xiàn)象一般是由于色譜系統(tǒng)泄漏造成的，其處理方法：尋找各個(gè)接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可?！　×硗膺€有一中可能是柱壓不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴(yán)重一點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致泵無法吸上液體，原因就是泵里進(jìn)了空氣?！　√幚矸椒ǎ捍蜷_Purge閥，用3-5ml/min的流速?zèng)_洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借助外力吸出氣泡。

異常的色譜峰指的是色譜圖中的無峰或出現(xiàn)負(fù)峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對(duì)稱等情況。一般來說，異常峰是實(shí)驗(yàn)工作中較為棘手的問題。異常峰的出現(xiàn)會(huì)影響色譜分析的結(jié)果。通常情況下，峰型問題是由分離系統(tǒng)所決定的。在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對(duì)于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對(duì)待，從主要問題出發(fā)，一個(gè)一個(gè)加以解決。
 

　　1.色譜圖中未出峰
 

　　系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解;泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確;檢測(cè)器設(shè)置不正確
 

　　2.一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰
 

　　流動(dòng)相吸收本底高;進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣;樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。
 

　　3.所有峰均為負(fù)峰
 

　　信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒;光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
 

　　4.所有峰均為寬峰
 

　　系統(tǒng)未達(dá)到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。
 

　　5.所出峰比預(yù)想的小
 

　　樣品黏度過大;進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差;檢測(cè)器設(shè)置不正確.定量環(huán)體積不正確;檢測(cè)池污染;檢測(cè)器燈出現(xiàn)問題。
 

　　6.出現(xiàn)雙峰或肩峰
 

　　進(jìn)樣量過大;樣品濃度過高;保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞;保護(hù)拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
 

　　7.前伸峰
 

　　進(jìn)樣量或樣品濃度高，溶解樣品的溶劑較流動(dòng)相極性強(qiáng);保護(hù)柱或色譜柱污染或失效。
 

　?、僦鶞氐停荷咧鶞?②樣品溶劑選擇不恰當(dāng)：使用流動(dòng)相作為樣品溶劑;③樣品過載：降低樣品含量;④色譜柱損壞：更換柱子。
 

　　8.拖尾峰
 

　　柱超載，降低樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾，對(duì)樣品進(jìn)行清潔過濾;調(diào)整流動(dòng)相;硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值;柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效，更換燒結(jié)不銹鋼;加在線過濾器，對(duì)樣品進(jìn)行過濾;死體積或柱外體積過大，將連接點(diǎn)降至谷值;盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管;柱效下降，更換柱子;采用保護(hù)柱，對(duì)柱子進(jìn)行再生。
 

　　9.出現(xiàn)平頭峰
 

　　檢測(cè)器設(shè)置不正確;進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。
 

　　10.出現(xiàn)鬼峰
 

　　進(jìn)樣閥殘余峰，可能為上次樣品的殘余。在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來平衡和清洗系統(tǒng);樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預(yù)處理;流動(dòng)相污染，更換新流動(dòng)相，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過濾;盡可能使用HPLC級(jí)試劑;流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。
 

　　11.峰分叉
 

　　①保護(hù)柱或分析柱污染：取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析,如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。②樣品溶劑不溶于流動(dòng)相改變樣品溶劑,如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。
 

　　12.峰變形
 

　　樣品過載，減少樣品載量。
 

　　13.早出的峰變形
 

　　樣品溶劑選擇不恰當(dāng) ①減少進(jìn)樣體積 ②運(yùn)用低極性樣品溶劑
 

　　14.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
 

　　柱外效應(yīng) ①調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路) ②使用小體積的流通池
 

　　15.酸性或堿性化合物的峰拖尾
 

　　緩沖不合適①使用濃度50～100 mM的緩沖液②使用Pka等于流動(dòng)相pH值的緩沖液
 

　　16.額外的峰
 

　　(1)樣品中有其他組分：正?，F(xiàn)象;
 

　　(2)前一次進(jìn)樣的洗脫峰：①增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率②提高流速;
 

　　(3)空位或鬼峰：①檢查流動(dòng)相是否純凈 ②使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 ③減少進(jìn)樣體積。