【***** 維修保養(yǎng)】液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術，是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質的特點而被廣泛應用于生物化學、**及臨床分析?！　《合嗌Vzui重要的就是它的色譜柱。液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱；反相柱填料主要以硅膠為基質，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等?！　≡谌粘７蛛x分析工作中，色譜柱的正確使用和維護**重要，色譜柱使用是否得當，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。　　(1)在裝卸、更換色譜柱時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產生空隙。如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。避免壓力和溫度的急劇變化及**機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩?！　?2)經常用強溶劑沖洗色譜柱，**保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進人柱內，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。在完成分離分析工作之后，不應立即停機，需及時對色譜分析系統(tǒng)進行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內的雜質?！　?3)因為液相色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，當出現(xiàn)色譜峰高陣低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰時，一般來說可能是柱效下降。反相柱的再生，采用以甲醇:水=95: 5(V/V),純甲醇，二氯甲烷等溶劑作流動相，順次沖洗，每種流動相流經色譜柱的量為2030倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作流動相沖洗色譜柱每步注意平衡溶劑的順序，不要顛倒每種流動相流經色譜柱的量為20-30倍柱體積(因異丙醇的粘度較大，沖洗過程中請隨時注意調整沖洗的流速)，用甲醇沖洗完后，再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴格脫水。離子交換柱的再生。長時間在高pH值和高離子強度緩沖溶液中使用，將導致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗，可使陽離子柱再生;反之，用稀堿緩沖溶液沖洗，可使陰離子柱再生。以上色譜柱的再生方法并不是的標準方法，使用者可根據(jù)自己的實際經驗和目的，選擇合適的并能溶解柱內污染物的溶劑作流動相，按正方向或反方向的沖洗。但是需要指出是，無論采用什么方法再生色譜柱，均不可能**隊復柱效或其他參數(shù)至新柱水平。 了解這些輕松維護液相色譜柱

　　在我們平常的工作當中，液相色譜柱的正確使用和維護**重要，液相色譜柱使用是否得當，直接影響液相色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。

　　在液相色譜操作過程中，我們需要了解下面的問題，方便維護液相色譜柱。

　　1.柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產生空隙。

　　2.如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。

　　3.避免壓力和溫度的急劇變化及**機械震動。溫度的突然變化或者使液相色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。

　　4.應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)?*是水，反之亦然。

　　5.如使用柱溫控制裝置時，應注意在通人流動相后才能升溫。

　　6.一般說來液相色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。

　　7.選擇使用適宜的流動相，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。

　　8.避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。

　　9.經常用強溶劑沖洗液相色譜柱，**保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。

　　10.保存液相色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。**禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。

　　11.液相色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進人柱內，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。

　　12.在完成分離分析工作之后，不能馬上就關機，需及時對色譜分析系統(tǒng)進行沖洗，一般0.5h以上，以除去液相色譜柱內的雜質。