安捷倫液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路?！　?：安捷倫液相色譜儀安裝條件　　一、環(huán)境要求：　　1、溫度：15～30℃　　2、日溫差：±3℃　　3、相對濕度：20%～85%　　4、地面：平滑、不易起塵　　5、安裝場所： 無震動、周圍無腐蝕性介質(zhì)、無電磁場干擾，操作臺縱深尺寸60cm以上，避免空調(diào)直吹風，避免直射陽光。　　6、推薦液相色譜儀工作臺：長2米、寬0.8米，承重大于80公斤。建議離墻距離0.3米以上?！　∫话阍诎惭b的實際空間上，還要考慮：　　與其它儀器間距大于60cm，儀器后面板應(yīng)留有不小于50cm的空間，前面板至操作臺邊緣距離不小10cm；儀器安裝平穩(wěn)牢固，接入了UPS電源，儀器外殼與地線連接。　　二、電源要求：　　1、單相交流220V，(+5%～-10%)，50～60Hz，有單獨的良好接地?！　?、若電壓不穩(wěn)，需配置穩(wěn)壓電源，功率大于2.5千瓦?！　?、準備1個合格的萬用接線板，總數(shù)不小于5個扁平三角接線插座?！　?、斷電續(xù)電能力：斷電情形，設(shè)備能持續(xù)運行1小時以上?！　?、接地：安裝場所應(yīng)有可靠接地線裝置　　三、溶劑要求：　　1、二次重蒸餾水，1000毫升以上(建議用0.45微米水相濾膜過濾)?！　?、乙腈或甲醇(色譜純或優(yōu)級純)，1500毫升以上(建議用0.45微米有機相濾膜過濾)?！　∷摹⒉僮飨到y(tǒng)：Windows XP 操作系統(tǒng)　　硬件要求：內(nèi)存不低于2G；硬盤不低于160G；配有網(wǎng)絡(luò)適配器(2個網(wǎng)卡)；帶光區(qū)驅(qū)動　　第二、安捷倫液相色譜儀安裝方法：　　1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：　　a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成?！　≈宇^采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3/16英寸的內(nèi)螺紋(**外已規(guī)范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)?！　≡趦啥酥宇^內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有**的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕?！　、柱填料：　　液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定?！　≌嘀憾嘁怨枘z為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10 μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠?！　》聪嘀褐饕且怨枘z為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分?！　〕Ｓ玫钠渌姆聪嗵盍线€有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10 μm之間?！　?，色譜柱的安裝：　　a、拆開柱包裝盒，確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑?！　、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用?！　、 按柱管上標示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護柱)；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時**要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止，再用扳手繼續(xù)順時針擰1/4-1/2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手繼續(xù)順時針擰1/4圈，直至不漏液為止?！　〉谌?、液相色譜柱的使用：　　色譜柱在使用前，進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是zui佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性?！　?、樣品的前處理：　　a、使用流動相溶解樣品?！　、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)?！　、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。　　2、流動相的配制：　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：　　a、流動相對樣品具有**的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。　　b、流動相具有**惰性，與樣品不產(chǎn)生化學反應(yīng)(特殊情況除外)。　　c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)?！　、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。　　e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行?！　、在流動相配制好后，**要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用?！　?、流動相流速的選擇：　　因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求zui佳柱效，使用zui佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。　　當選用zui佳流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)?！　∽⒁猓骸　.由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。　　b.對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。　　c.含水流動相在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要放置時間過長。加入疊氮化鈉，防止**生長?！　.流動相要求使用0.45 μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)?！　.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能?！　?、柱性能測試：　　啟動液相色譜儀：a、流動相流速設(shè)定為1ml/min?！　、UV檢測器波長設(shè)定為254nm?！　∈褂贸鰪S測試時使用的流動相組成及測試樣品?！　∮涗洸⒂嬎銣y試結(jié)果。 液相色譜儀常見故障及處理方法 　　液相色譜儀常見故障及處理方法簡析

　　1、液相色譜儀—氣泡溢出

　　流動相內(nèi)有氣泡,關(guān)閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法**不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0～3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。

　　2、液相色譜儀—柱壓高原因

　　(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi);

　　(2)樣品污染沉積。處理對于**種情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

　　3、液相色譜儀—既無壓力指示,又無液體流過

　　(1)泵密封墊圈磨損;

　　(2)大量氣泡進入泵體。處理對于**種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

　　4、液相色譜儀—壓力波動大,流量不穩(wěn)定

　　原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

　　5、液相色譜儀—出峰不佳,峰分叉

　　(1)色譜柱被污染;

　　(2)柱頭填料塌陷。處理對于**種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

　　6、液相色譜儀—峰面積重復性不佳

　　(1)進樣閥漏液;

　　(2)加樣針不到位。

　　(3)液量不足.

　　處理對于**種情況更換進樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,**樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),**溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。