紫外可見(jiàn)分光光度法　　紫外-可見(jiàn)分光光度法是在190～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測(cè)定的方法。當(dāng)光穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，物質(zhì)對(duì)光的吸收程度隨光的波長(zhǎng)不同而變化。因此，通過(guò)測(cè)定物質(zhì)在不同波長(zhǎng)處的吸光度，并繪制其吸光度與波長(zhǎng)的關(guān)系圖即得被測(cè)物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定大吸收波長(zhǎng)λmax和小吸收波長(zhǎng)λmin。物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。因此，可以通過(guò)特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)樣品的光譜與對(duì)照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較，或通過(guò)確定大吸收波長(zhǎng)，或通過(guò)測(cè)量?jī)蓚€(gè)特定波長(zhǎng)處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時(shí)，在大吸收波長(zhǎng)處測(cè)量**濃度樣品溶液的吸光度，并與**濃度的對(duì)照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度?！　x器的校正和檢定　　1.波長(zhǎng) 由于環(huán)境因素對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用的儀器進(jìn)行**校正檢定外，還應(yīng)于測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。常用汞燈中的較強(qiáng)譜線(xiàn)237.83nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm，334.15nm，365.02nm，404.66nm，435.83nm，546.07nm與576.96nm；或用儀器中氘燈的486.02nm與656.lOnm譜線(xiàn)進(jìn)行校正；鈥玻璃在波長(zhǎng)279.4nm，287.5nm，333.7nm，360.9nm，418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm與637.5nm處有尖銳吸收峰，也可作波長(zhǎng)校正用，但因來(lái)源不同或隨著時(shí)間的推移會(huì)有微小的變化，使用時(shí)應(yīng)注意；近年來(lái)，常使用高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器，以10%高氯酸溶液為溶劑，配制含氧化鈥(Ho2O3)4%的溶液，該溶液的吸收峰波長(zhǎng)為241.13nm，278.lOnm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm和640.52nm?！　x器波長(zhǎng)的允許誤差為：紫外光區(qū)±1nm，500nm附近±2nm?！　?.吸光度的準(zhǔn)確度 可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱(chēng)定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，應(yīng)符合表中的規(guī)定。　　-----------------------------------------------------------------------------------　　波長(zhǎng)/nm 235(小) 257(大) 313(小) 350(大)　　-----------------------------------------------------------------------------------　　吸收系數(shù)()的規(guī)定值 124.5 144.0 48.6 106.6　　吸收系數(shù)()的許可范圍 123.0～126.0 142.8～146.2 47.0～50.3 105.5～108.5　　-----------------------------------------------------------------------------------　　3.雜散光的檢查 可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定?！　?---------------------------------------------　　試劑 濃度/%(g/ml) 測(cè)定用波長(zhǎng)/nm 透光率/%　　----------------------------------------------　　鈉 1.00 220 <0.8　　亞硝酸鈉 5.00 340 <0.8　　----------------------------------------------　　對(duì)溶劑的要求　　含有雜原子的有機(jī)溶劑，通常均具有很強(qiáng)的末端吸收。因此，當(dāng)作溶劑使用時(shí)，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長(zhǎng)。例如甲醇、乙醇的截止使用波長(zhǎng)為205nm。另外，當(dāng)溶劑不純時(shí)，也可能增加干擾吸收。因此，在測(cè)定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求，即將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白(即空白光路中不置**物質(zhì))測(cè)定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度，在220～240nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.40，在241～250nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.20，在251～300nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.10，在300nm以上時(shí)不得超過(guò)0.05?！　y(cè)定法　　測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)±2nm以?xún)?nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸光度，或由儀器在規(guī)定波長(zhǎng)附近自動(dòng)掃描測(cè)定，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確。除另有規(guī)定外，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±2nm以?xún)?nèi)，并以吸光度大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。一般供試品溶液的吸光度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間為宜。儀器的狹縫波帶寬度宜小于供試品吸收帶的半高寬度的**之一，否則測(cè)得的吸光度會(huì)偏低；狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸光度不再增大為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，或由儀器自動(dòng)扣除空白讀數(shù)后再計(jì)算含量?！　‘?dāng)溶液的pH值對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響時(shí)，應(yīng)將供試品溶液的pH值和對(duì)照品溶液的pH值調(diào)成一致?！　?.鑒別和檢查 分別按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行?！　?.含量測(cè)定 一般有以下幾種方法?！　?1)對(duì)照品比較法 按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量的**±10%，所用溶劑也應(yīng)**一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度后，按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度：　　cx=(Ax/AR)cR　　式中 cx為供試品溶液的濃度；　　Ax為供試品溶液的吸光度；　　cR為對(duì)照品溶液的濃度；　　AR為對(duì)照品溶液的吸光度?！　?2)吸收系數(shù)法 按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí)，吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100，并注意儀器的校正和檢定?！　?3)計(jì)算分光光度法 計(jì)算分光光度法有多種，使用時(shí)應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸光度處在吸收曲線(xiàn)的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí)，波長(zhǎng)的微小變化可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響，故對(duì)照品和供試品的測(cè)試條件應(yīng)盡可能一致。計(jì)算分光光度法一般不宜用作含量測(cè)定?！　?4)比色法 供試品本身在紫外-可見(jiàn)光區(qū)沒(méi)有強(qiáng)吸收，或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑，使反應(yīng)產(chǎn)物的大吸收移至可見(jiàn)光區(qū)，這種測(cè)定方法稱(chēng)為比色法?！　∮帽壬y(cè)定時(shí)，由于顯色時(shí)影響顯色深淺的因素較多，應(yīng)取供試品與對(duì)照品或標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對(duì)照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定對(duì)照品和供試品溶液的吸光度后，按上述(1)法計(jì)算供試品濃度?！　‘?dāng)吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線(xiàn)性時(shí)，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對(duì)照品溶液，用溶劑補(bǔ)充至同一體積，顯色后測(cè)定各份溶液的吸光度，然后以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，再根據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得其相應(yīng)的濃度，并求出其含量。 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)故障問(wèn)題解決方案

　　1、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)噪音較大

　　原因：光源燈泡使用時(shí)間超過(guò)壽命期

　　處理方法：更換光源燈泡

　　2、在使用過(guò)程中，出現(xiàn)數(shù)字顯示不能歸零，同時(shí)伴有圖線(xiàn)記錄基線(xiàn)位置偏高

　?、俟怆姳对龅壤匣?，性能降低

　　②信號(hào)處理板可能發(fā)生故障

　?、矍爸梅糯蟀娉霈F(xiàn)故障，引起反饋量增大

　　處理方法：

　?、匍_(kāi)機(jī)通電，先做記錄故障曲線(xiàn)，再與原始記錄的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)照，找出異同點(diǎn)，并作一下定性定能分析。然后用一只同型號(hào)規(guī)格的新光電倍增管替換機(jī)上的光電管，再開(kāi)機(jī)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果記錄出來(lái)的圖線(xiàn)并沒(méi)有什么變化，由此證明光電倍增管沒(méi)有老化變質(zhì)。

　　②進(jìn)一步檢查信號(hào)處理板，未發(fā)現(xiàn)信號(hào)處理板各元器件損壞，對(duì)影響靈敏度有關(guān)的電位器檢測(cè)，結(jié)果測(cè)得數(shù)據(jù)正常，這說(shuō)明信號(hào)處理板沒(méi)有故障。

　　3、自檢時(shí)提示波長(zhǎng)自檢出錯(cuò)

　　原因：

　　自檢過(guò)程中可能打開(kāi)過(guò)儀器樣品室的蓋子

　　處理方法：

　　關(guān)上儀器樣品室蓋子，重新自檢

　　4、儀器自檢時(shí)提示通訊錯(cuò)誤

　　原因：

　　儀器與電腦之間的數(shù)據(jù)線(xiàn)沒(méi)有連接好

　　處理方法：

　　連接好數(shù)據(jù)線(xiàn)，重新打開(kāi)儀器和軟件，重新自檢

　　5、測(cè)試過(guò)程中提示能量太低

　　原因：

　?、俟庠礋襞菔褂脮r(shí)間超過(guò)壽命期

　?、跇映刂杏胁煌腹獾臇|西擋住了光

　　處理方法：

　　更換光源燈泡；拿走擋光的物品