【***** 使用手冊(cè)】液相色譜儀(HPLC)現(xiàn)已成為有機(jī)化學(xué)分析的重要手段之一。和其它分析儀器一樣，想要HPLC很好地為你工作、得到可靠的數(shù)據(jù)，首先你要保養(yǎng)好它，使它處于一個(gè)良好的待機(jī)狀態(tài)，這樣你操作它進(jìn)行分析時(shí)就可以比較順利地獲得理想的結(jié)果。而且良好規(guī)范的操作習(xí)慣可以延長(zhǎng)儀器使用壽命。筆者將從液相色譜儀使用中的幾個(gè)注意事項(xiàng)進(jìn)行討論，給新從事HPLC分析的工作者一點(diǎn)操作建議，希望能對(duì)大家進(jìn)行正確的操作儀器起到幫助。　　基本操作　　1). 嚴(yán)格過(guò)濾色譜純流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。　　2). 對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣20～30分鐘?！　?). 打開(kāi)色譜工作站，連接好流動(dòng)相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)?！　?).有一段時(shí)間沒(méi)用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10ml/min?！　?). 調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過(guò)2000psi。選用合適的流速。　　6). 設(shè)定不同樣品的檢測(cè)器分析參數(shù)?！　?). 等基線走穩(wěn)即可進(jìn)樣分析，分析樣品時(shí)對(duì)樣品的前處理非常重要?！　?).關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)檢測(cè)器，泵不要關(guān)掉，應(yīng)改用流動(dòng)相沖洗泵，不同的流動(dòng)相沖洗時(shí)間不同，一般沖洗30min，若是緩沖鹽作流動(dòng)相應(yīng)先用水沖洗30min，再用純甲醇沖洗。　　9). 然后關(guān)液相泵?！　?0). 需要把進(jìn)樣閥沖洗干凈，另把注射器等工具清理整潔?！　∽⒁馐马?xiàng)　　一、加裝保護(hù)柱　　保護(hù)柱的作用是過(guò)濾掉來(lái)自流動(dòng)相和樣品的化學(xué)“拉圾”同時(shí)也可以有效除去流動(dòng)相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動(dòng)相吸入口、進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污然,因此,加裝保護(hù)柱是必要的,特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時(shí)更是保護(hù)分析柱必不可少的措施。　　二、過(guò)濾流動(dòng)相和樣品　　流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成,原則上,所有經(jīng)過(guò)色譜柱的流動(dòng)相均應(yīng)過(guò)濾,但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別:當(dāng)有機(jī)溶劑用色譜純級(jí),水用石英亞沸水或其它超純水時(shí),在能確保水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量且沒(méi)有受到污染時(shí),過(guò)濾并無(wú)更多實(shí)際意義。　　三、凈化樣品　　當(dāng)樣品中含有對(duì)色譜柱有損害的化學(xué)成分,如產(chǎn)生*性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì),以及可能對(duì)柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對(duì)樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分?！　∷?、避免過(guò)高的柱壓　　雖然液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6000 p si (磅/平方英寸) ,但過(guò)高及過(guò)大的壓力變化均會(huì)縮短色譜柱的壽命,避免的方法是　　(1)柱壓過(guò)高時(shí),盡可能采用較小的流速,以不超過(guò)柱zui大允許壓力的一半為宜?！　? 2)當(dāng)流速較大時(shí),應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位?！　?3)使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí),進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則超過(guò)20%的壓力沖擊會(huì)很快使柱報(bào)廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時(shí),柱切換要避免在高壓下進(jìn)行?！　∥濉⒄_及時(shí)的沖洗　　開(kāi)始試驗(yàn)前,應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對(duì)于新色譜柱,如無(wú)特殊說(shuō)明均為評(píng)價(jià)報(bào)告中所用流動(dòng)相。柱中當(dāng)前溶劑**要與分析樣品所用流動(dòng)相互溶,如不能混溶,要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過(guò)渡。 制備液相色譜故障排查及解決方案

　　制備液相色譜中，有三個(gè)可以觀察到的狀態(tài)：柱壓、檢測(cè)器基線、譜圖。通過(guò)觀察和記錄這三個(gè)狀態(tài)可以監(jiān)測(cè)儀器是否正常。若某個(gè)狀態(tài)出現(xiàn)異常，故障排查和解決方案如下。

　　1、柱壓波動(dòng)

　　1）吸液管路進(jìn)氣泡

　　①溶劑不足，吸濾頭吸入空氣，添加溶劑并排氣泡。

　?、谖鼮V頭臟了或堵塞，用異丙醇（或5%稀硝酸）清洗。

　?、廴軇┲杏袣馀荩ㄓ绕鋬煞N以上溶劑混合），超聲（或抽濾）脫氣。

　　2）泵流量不穩(wěn)

　?、賳蜗蜷y堵塞，大流速purge，若不能解決，則需拆下單向閥（異丙醇）超聲清洗清洗或更換單向閥。

　?、谥芊馊δp，更換密封圈。

　?、郾妙^污染，柱塞桿往復(fù)活動(dòng)受阻，清洗泵頭。

　　3）柱床塌陷，維修或更換色譜柱。

　　4）流動(dòng)相混合后吸放熱導(dǎo)致溫度變化，以致柱壓波動(dòng)，如乙腈和水混合吸熱，甲醇和水混合放熱。若影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，則增加柱溫箱或流動(dòng)相預(yù)混。

　　2、柱壓升高或超壓。

　　逐段排查堵塞的位置：

　　1）先拆下色譜柱，接上兩通運(yùn)行，若是色譜柱堵塞：

　?、龠M(jìn)樣后樣品析出，用合適的溶劑反沖色譜柱。

　?、诰彌_鹽析出，用大比例水相的流動(dòng)相沖洗色譜柱。

　　③機(jī)械雜質(zhì)堵塞篩板，異丙醇小流速反沖色譜柱。

　?、苌V柱污染嚴(yán)重，需維修或充填。

　　2）混合器堵塞，維修或更換。

　　3）六通閥堵塞，將泵液管路接到連接色譜柱的閥口處，將閥扳至load狀態(tài)，用易溶樣品的溶劑小流速?zèng)_洗。

　　4）壓力傳感器故障，維修或更換。

　　3、檢測(cè)器基線波動(dòng)

　　1）基線有規(guī)律波動(dòng)，且幅度較大，則可能有氣泡持續(xù)進(jìn)入流通池。排查氣泡來(lái)源并用異丙醇沖洗檢測(cè)器或色譜柱。

　　2）基線小幅度規(guī)律波動(dòng)，可能是檢測(cè)器燈能量不足（能量下降后，低波長(zhǎng)下靈敏度先下降。

　　3）基線漂移。

　　①流動(dòng)相在此檢測(cè)波長(zhǎng)下有吸收。更換流動(dòng)相或改變波長(zhǎng)。

　　②色譜柱或檢測(cè)池污染。以異丙醇沖洗色譜柱或檢測(cè)池，或?qū)z測(cè)池中透鏡玻片取出清洗。

　　4、譜圖重現(xiàn)性差

　　1）檢查方法設(shè)置，包括流速、梯度、波長(zhǎng)。

　　2）檢查流動(dòng)相配置是否有誤，A、B兩相是否放反。

　　3）檢查柱壓與之前是否有差異，若有變化，則前面1和2進(jìn)行排查。

　　4）進(jìn)樣前色譜柱是否**平衡好。

　　5）樣品溶解方法。