【***** 使用手冊(cè)】離子色譜柱使用純水進(jìn)行沖洗是錯(cuò)誤的。因?yàn)樵谝话闱闆r下，如果直接使用純水對(duì)離子色譜柱進(jìn)行沖洗，很容易導(dǎo)致離子色譜柱中的固定相流失并且出現(xiàn)相塌陷現(xiàn)象，因此一般情況下并不建議直接使用純水對(duì)離子色譜柱進(jìn)行沖洗的。通常我們?cè)趯?duì)離子色譜柱進(jìn)行沖洗時(shí)，是建議在純水中加入甲醇或乙腈等物質(zhì)，再對(duì)離子色譜柱進(jìn)行沖洗，這樣的對(duì)離子色譜柱進(jìn)行沖洗一般不會(huì)對(duì)離子色譜柱造成影響。而離子色譜柱之所以不能直接用純水進(jìn)行沖洗的原因分析有以下幾點(diǎn)：　　1.一般離子色譜柱的材質(zhì)不允許長(zhǎng)時(shí)間被純水沖洗。由于現(xiàn)今大部分離子色譜柱以硅膠為基質(zhì)，而硅膠的性質(zhì)卻是其溶解度在純水中會(huì)比一般含有有機(jī)溶劑中要大得多，因而使用純水對(duì)離子色譜柱進(jìn)行沖洗，會(huì)讓離子色譜柱中的硅膠材質(zhì)產(chǎn)生溶解，長(zhǎng)時(shí)間的純水沖洗會(huì)導(dǎo)致離子色譜柱中的固定相流失，從而降低了離子色譜柱的柱效?！　?.對(duì)一般C18柱來(lái)說(shuō)，因?yàn)镃18長(zhǎng)鏈本身是溶解在水中的，而且C18長(zhǎng)鏈之間的相互作用力是大于C18和水分子之間的作用力的，所以如果長(zhǎng)時(shí)間的用純水對(duì)離子色譜柱進(jìn)行沖洗，會(huì)讓C18長(zhǎng)鏈之間相互靠近，并且使得相互聯(lián)結(jié)的C18長(zhǎng)鏈在硅膠質(zhì)地的基質(zhì)表面上倒伏，對(duì)疏水性物質(zhì)的保留能力會(huì)因此下降，即相塌陷。為了給只能溶解在純水中的樣品提供分析條件，有些企業(yè)推出適合做離子色譜柱沖洗的純水柱，這種純水柱不會(huì)產(chǎn)生相塌陷，因而可以對(duì)只溶解在純水中的樣品進(jìn)行分析了。　　3.如果離子色譜柱中使用過(guò)含緩沖鹽的流動(dòng)相時(shí)，用純水沖洗并不能將緩沖鹽洗去。這是因?yàn)榫彌_鹽本身是難溶于有機(jī)溶劑中的，C18反相柱中用到的填料是在硅膠表面上接上的C18長(zhǎng)鏈，這相當(dāng)于一個(gè)疏水的有機(jī)相，并且因?yàn)楣枘z基體被有機(jī)物質(zhì)包裹著，所以在操作時(shí)使用緩沖鹽水溶液做流動(dòng)相時(shí)緩沖鹽可能不容易到達(dá)硅膠基質(zhì)，不至損害基體。但是使用的流動(dòng)相一般來(lái)說(shuō)通常會(huì)有一些有機(jī)溶劑，而且這些有機(jī)溶劑和C18長(zhǎng)鏈?zhǔn)腔ハ嗳芙獾?，因此有機(jī)溶劑的加入增強(qiáng)了流動(dòng)相滲入硅膠基質(zhì)的能力，能讓一部分的緩沖鹽與硅膠基質(zhì)接觸。所以直接用純水沖洗離子色譜柱只能沖洗其表面的緩沖鹽，但是滲入到離子色譜柱中深處的緩沖鹽仍舊會(huì)殘留在那里。所以建議在沖洗離子色譜柱的時(shí)候，在純水中加入一部分有機(jī)溶劑，水和有機(jī)溶劑的比例視情況而定，這樣含有有機(jī)溶劑的水便能對(duì)離子色譜柱進(jìn)行沖洗了。 想知道色譜柱的壽命延長(zhǎng)方式有哪些？

色譜柱的利用壽命，除了與所分析的樣品和流動(dòng)相及利用頻率有關(guān)系外，主要的是與日常的委會(huì)密切相關(guān)。為延長(zhǎng)色譜柱的利用壽命，維護(hù)您的利益，請(qǐng)仔細(xì)閱讀此部分。 色譜柱的利用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個(gè)指標(biāo)來(lái)衡量，假設(shè)一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認(rèn)為該色譜柱已經(jīng)結(jié)束。因此，延長(zhǎng)色譜柱利用壽命的關(guān)鍵是，**引起柱效下降和柱壓升高的因素。

以下是色譜柱的日常維護(hù)點(diǎn)子：

1.流動(dòng)相的PH應(yīng)在利用的范圍內(nèi)反相色譜柱由于填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動(dòng)相超過(guò)其PH范圍將會(huì)導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，利用壽命變短。由于流動(dòng)相的PH 控制欠妥而對(duì)色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復(fù)，因此必須認(rèn)真對(duì)待，嚴(yán)格控制流動(dòng)相的PH值。

2.去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒 樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì)堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會(huì)引起柱壓的升高，而且也會(huì)引起柱效下降，因?yàn)楹Y板的堵塞會(huì)引起液流不均，導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議利用超純水和色譜純?cè)噭诜治鰳悠非皩?duì)樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾，流動(dòng)相過(guò)0.45μm濾膜。

3.利用維護(hù)柱或在線過(guò)濾器 樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能****固體顆粒物質(zhì)，因?yàn)楸玫哪p、密封圈和管路的老化也會(huì)產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。維護(hù)柱和在線過(guò)濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此能夠阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對(duì)樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上維護(hù)柱或在線過(guò)濾器。 假設(shè)確認(rèn)色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的，可選擇以下方式進(jìn)行補(bǔ)救：

先在色譜柱前加上維護(hù)柱或在線過(guò)濾器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。

先在色譜柱進(jìn)樣端加上維護(hù)柱或在線過(guò)濾器，然后反向利用。

色譜柱參數(shù)

物理性質(zhì)

柱長(zhǎng)，內(nèi)徑，如250*4.6mm。一般柱長(zhǎng)在2—250mm，柱越長(zhǎng)，分離度越高，但柱壓更高，分離所需時(shí)間更長(zhǎng);但分離度與理論塔板數(shù)的平方根成正比，所以一昧增加柱長(zhǎng)并不是***有效的分離手段，一般情況下，150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數(shù)。

粒徑，影響色譜分離度。粒徑越小，分離越快，柱效越高，但柱壓力越高，柱容易被污染，導(dǎo)致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料，復(fù)雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑，更大內(nèi)徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，因此如何選擇填料粒徑需要根據(jù)現(xiàn)實(shí)情況而定。

孔徑，60A，120A，300A等?？讖叫。瑒t含孔率高，比表面積大，載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配，保證分子自由進(jìn)出填料孔并與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

顆粒形狀，一般有球形和不規(guī)則形，當(dāng)使用黏度較大的流動(dòng)相時(shí)，球形顆?？梢越档椭鶋?，延長(zhǎng)色譜柱壽命。

苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩(wěn)定，應(yīng)用pH范圍寬，具有更強(qiáng)的疏水性，對(duì)蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強(qiáng)度較小，有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損，批次重復(fù)性較差，商品化色譜柱不多，一般價(jià)格較貴。

載碳量：基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。

鍵合相：鍵合試劑不同，對(duì)化合物的選擇性不同，一般長(zhǎng)鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩(wěn)定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定。

封端：用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來(lái)，以減少殘留的硅醇基，減輕待測(cè)組分與酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象。尤其對(duì)于極性樣品而言，未封端處理的色譜柱分離效果較差。

現(xiàn)在商品化的液相色譜柱琳瑯滿目，根據(jù)色譜柱的參數(shù)可以給我們提供一個(gè)初步的選擇，但由于各個(gè)儀器廠商的填料技術(shù)和鍵合技術(shù)都有差異，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有適合堿性樣品的等等。所以在選擇色譜柱前要好好研究色譜柱參數(shù)，仔細(xì)閱讀色譜柱說(shuō)明書，才能找到合適的色譜柱和適宜的分離方法。