安捷倫液相色譜儀的規(guī)范操作　　1. 目的：明確安捷倫液相色譜儀的規(guī)范操作，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性?！　?. 范圍：適用于安捷倫液相色譜儀。　　3. 職責(zé)：檢驗(yàn)人員對(duì)此負(fù)責(zé)?！　?. 操作規(guī)程：　　4.1 系統(tǒng)組成　　本系統(tǒng)由1個(gè)溶劑二元輸送泵(分主/A泵和副/B泵)、手動(dòng)進(jìn)樣閥、柱溫箱、檢測(cè)器、化學(xué)工作站和電腦等組成?！　?.2 準(zhǔn)備　　4.2.1使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗(yàn)方法準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣20min?！　?.2.2 根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱(柱進(jìn)出口位置應(yīng)與流動(dòng)相流向一致)和定量環(huán)?！　?.2.3 配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液(也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制)，用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾?！　?.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正?！　?.1 將待測(cè)樣品按要求前處理，準(zhǔn)備HPLC 所需流動(dòng)相，檢查線路是否連接完好，廢液瓶是否夠用等?！　?.3開機(jī)：　　4.3.1 打開計(jì)算機(jī),進(jìn)入中文Windows XP畫面,并運(yùn)行CAG Bootp Server程序?！　?.3.2 打開 1200 LC 各模塊電源。　　4.3.3 待各模塊自檢完成后，雙擊[Instrument 1 Online]圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1200LC　　通訊，進(jìn)入的工作站畫面如下所示?！　?.3.4 從[視圖]菜單中選擇[方法和運(yùn)行控制]畫面, 點(diǎn)擊[視圖]菜單中的[顯示頂部 工具欄]， [ 顯示狀態(tài)工具欄]，[系統(tǒng)視圖],[樣品視圖]，使其命令前有[√]標(biāo)志，來(lái)調(diào)用所需的界面?！　?.3.5 把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。　　4.3.6 打開沖洗閥?！　?.3.7 點(diǎn)擊[泵]圖標(biāo)，點(diǎn)擊[設(shè)置泵…]選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面?！　?.3.8 設(shè)流速：5ml/min，點(diǎn)擊[確定]?！　?.3.9 點(diǎn)擊[泵] 圖標(biāo)，點(diǎn)擊[控制…]選項(xiàng)，選中[啟動(dòng)]，點(diǎn)擊[確定] ，則系統(tǒng)開始沖洗，直到管線內(nèi)(由溶劑瓶到泵入口)無(wú)氣泡為止,切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止?！　?.3.10 點(diǎn)擊[泵] 圖標(biāo)，點(diǎn)擊[控制…]選項(xiàng)，選中[關(guān)閉]，點(diǎn)擊[確定]關(guān)泵， 關(guān)閉沖洗閥?！　?.3.11 點(diǎn)擊[泵]圖標(biāo)，點(diǎn)擊 [設(shè)置泵…選項(xiàng)]，設(shè)流速：1.0ml/min?！　?.3.12 點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如下圖所示(以單元泵為例)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積，點(diǎn)擊[確定]?！　?.4 數(shù)據(jù)采集方法編輯　　4.4.1開始編輯完整方法：從[方法]菜單中選擇[編輯完整方法…] 項(xiàng)，如下圖所示選中除[數(shù)據(jù)分析 ]外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫面。 4.4.2方法信息　　4.4.2.1在[方法注釋]中加入方法的信息(如：測(cè)試方法)。 4.4.2.2 點(diǎn)擊 [確定]， 進(jìn)入下一畫面。 4.4.3 泵參數(shù)設(shè)定　　4.4.3.1 在[流速]處輸入流量,如1ml/min，在[溶劑 B]處輸入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[時(shí)間表] ,編輯梯度。在[壓力限]處輸入柱子的zui大耐高壓，以保護(hù)柱子?！　?.4.3.2 點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫面?！　?.4.4 柱溫箱參數(shù)設(shè)定　　4.4.4.1 在[溫度]下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度,如：40度。并選中它,點(diǎn)擊[更多>>] 鍵,如圖所示,選中[與左側(cè)相同]，使柱溫箱的溫度左右一致。　　4.4.4.2 點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫面?！　?.4.5 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定：檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇zui大吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬：一般選擇zui大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸收區(qū)域 。參比帶寬：至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。同時(shí)可以輸入采集光譜方式，步長(zhǎng)，范圍，閾值。選中所用的燈?！　?.4.6 在[ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 ]中選中[ 數(shù)據(jù)采集]，點(diǎn)擊[確定]?！　?.4.7 點(diǎn)擊[方法]菜單，選中[方法另存為…]，輸入一方法名，如[測(cè)試]，點(diǎn)擊[確定]?！　?.4.8 從菜單 [視圖]中選中[在線信號(hào)],選中[信號(hào)窗口1],然后點(diǎn)擊[改變…] 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊[確定]。(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)10,選中[信號(hào)窗口2]?！　螕鬧改變]鍵，即可彈出右側(cè)的[編輯信號(hào)圖譜]窗口，進(jìn)而選擇所需的譜圖信號(hào)。 4.4.9 從[運(yùn)行控制]菜單中選擇[樣品信息]選項(xiàng)，如下圖所示，輸入操作者名稱，如[安裝工程師]；在[數(shù)據(jù)文件 ]中選擇[手動(dòng)]或[前綴/計(jì)數(shù)器]。區(qū)別: 手動(dòng)--每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。 Pr—在前綴/計(jì)數(shù)器----[前綴]框中輸入前綴，在[計(jì)數(shù)器]框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd數(shù)據(jù)0001，vwd數(shù)據(jù)0002……?！　?.4.10 點(diǎn)擊[確定] ,從[儀器] 菜單選擇[系統(tǒng)開啟]?！　?.4.11 等儀器準(zhǔn)備好，基線平穩(wěn)，用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。 **液相色譜儀的脫氣的必要性

　　在食品分析中，無(wú)論是殘留分析還是成分分析，HPLC 也已成為不可或缺的。流動(dòng)相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個(gè)很有效的措施。下面分析一下，**液相色譜脫氣的必要性，并總結(jié)歸納了脫氣常用的方法。

　　一、脫氣的必要性

　　流動(dòng)相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個(gè)很有效的措施。HPLC 泵在輸送液體時(shí)要產(chǎn)生很大的力量，由于氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當(dāng)氣泡存在時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個(gè)氣泡足夠大，液相泵將不能輸送**溶劑，而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限，泵將停止工作。當(dāng)一個(gè)氣泡通過(guò)輸液泵時(shí)，由于系統(tǒng)壓力大，氣泡通常會(huì)溶解在流動(dòng)相溶液中，隨流動(dòng)相通過(guò)柱子。但是到達(dá)檢測(cè)器流通池時(shí)系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測(cè)器流通池中又顯現(xiàn)，在色譜圖上會(huì)出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。

　　二、脫氣方法

　　1、吹氦脫氣法。

　　利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性，在0.1MPa 壓力下，以約60 mL/min 流速通入流動(dòng)相儲(chǔ)液容器中10～15min，可以很有效地從流動(dòng)相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。采用一個(gè)**分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動(dòng)相中將等體積的幾乎**氣體排除。這意味著1L 氦氣通過(guò)1L 流動(dòng)相就可完成排氣這個(gè)工作。這種脫氣方法雖然好，但氦氣價(jià)格較高，很少使用。

　　2、加熱回流法。

　　此法的脫氣效果較好。在操作時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會(huì)丟失，混合流動(dòng)相的比例會(huì)有變化。

　　3、抽真空脫氣法。

　　此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07MPa ，即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會(huì)使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡(jiǎn)單分析。

　　4、超聲波脫氣法。

　　將欲脫氣的流動(dòng)相置于超聲波清洗機(jī)中，用超聲波震蕩10～20min。此法的脫氣效果***差。