夾芯式電泳槽的使用方法與注意事項 電泳槽使用方法
時間:2023-01-07 09:32:02 作者:河北航信儀器 點擊:
【***** 使用手冊】所謂電泳,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運動速度不同,根據(jù)這一特征,應用電泳法便可以對不同物質(zhì)進行定性或定量分析,或?qū)?*混合物進行組份分析或單個組份提取制備,這在臨床檢驗或?qū)嶒炑芯恐芯哂袠O其重要的意義。電泳儀正是基于上述試驗方法設(shè)計制造的。下面簡單介紹其使用方法及注意事項。
一、如何使用電泳槽 夾芯式垂直電泳槽使用方法: 1、組成部件 (1)裝有鉑金絲的貯液槽一對,配有冷卻裝置及電泳緩沖液流出口?! ?2)凹型橡膠框,配有玻璃板,可分別制作厚度為lmm、1.5mm的凝膠板,操作時根據(jù)需要選擇適當厚度的玻璃板及梳子配套使用?! ?3)樣品孔模具(梳子)用于電泳加樣?! ?4)固定貯液槽的螺絲桿及螺母4對,28D、30型為5對?! ?5)橡膠管五根。兩根長的用于連接冷卻水的出入口;中等長度的兩根用于連接電極緩;中液的流出口;zui短的一根用于連接貯液槽間的冷卻水。 (6)導線1付?! ?、使用方法 (1)清洗部件 上述部件組裝前要**清洗干凈。尤其是玻璃板及凹形帶槽橡膠框,必須用泡沫海綿沾少許肥皂粉或洗滌劑**清洗干凈。清洗后的玻璃板應放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。 (2)組裝電泳槽 A、將四只固定螺桿插進一只貯液框(半上槽)的相應孔洞中,然后將貯液框仰放在桌上; 左手拿凹型槽橡膠??颍沂值哪粗概c中指握住玻璃板的兩側(cè)邊緣插到橡膠??騼?nèi) (注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板); 將帶有玻璃的橡膠模框子放在仰放的貯液槽框架上,其下緣必須對齊貯液槽框下緣; 雙手拿另一只貯液槽框與仰放在桌上的貯液槽框相合,并使橡膠框上的凸出線位于貯液槽有機玻璃框**; 裝上四只螺母,擰緊螺絲。注意擰緊螺絲時用力應均勻,用雙手按斜角位置雙雙逐漸擰緊; 將電泳槽垂直豎起,放在桌上,帶短玻璃板的貯液槽稱上槽(陰**),帶長玻璃板的貯液槽稱為下槽(陽**),在長玻璃板與橡膠框間有一縫隙。此縫隙可用已熔化的10%瓊脂沿長玻璃板下端灌入,為防止留存氣泡,可稍抬起一端即可趕去氣泡。待瓊脂**凝固后才能灌膠?! 、也可將槽垂直豎起,將帶有玻璃的橡膠??蛑苯臃湃氩壑校瑢ΨQ擰緊螺絲后,用瓊脂封底邊?! ?、灌膠 (1)先灌分離膠,待凝固后再灌濃縮膠。灌膠前接通冷卻水,夾緊連接上下貯液槽的兩根橡膠管?! ?2)用細頭滴管吸取膠液,沿長、短玻璃板中間縫隙從一端加入膠液。為防止產(chǎn)生氣泡,可稍拾起另一端(氣泡往高處走),不斷加入膠液。若單層膠(分離膠)則加膠量約距離短玻璃板上端0.3厘米處,輕輕加少許水,雙手輕輕將梳子插入,待膠凝后就可形成凹形加樣孔。 (3)為防止漏膠,在上、下貯液槽中立即加入蒸餾水,但蒸餾水不能超過短玻璃板上緣。 (4)膠凝固后即可看到樣品槽梳子與凝膠板間有一層折 射率不同的亮區(qū)?! ?、加樣 (1)松開連接上、下貯液槽兩根橡皮管上的夾子,放掉槽內(nèi)的蒸餾水,待水流完后,再夾緊夾子?! ?2)雙手輕輕取出樣品梳子,即可看到界線清楚的加樣孔,將孔中水分吸去(注意千萬不要碰壞孔沿的字面)。 (3)在上、下貯液槽中加入緩;中液,液體高度應超過上貯液槽短玻璃板上緣。 (40用微量注射器吸取**量的樣品加到長、短玻璃板間的凹型凝膠樣品孔內(nèi)(注意加樣動作要輕,針頭不能碰壞膠面)?! ?、電泳 一貯液槽導線與電泳儀的負極相連,下貯液槽導線與電泳儀的正極相連。檢查線路無誤,方可按照所要求的電壓電流進行電泳?! 《?、注意事項 1、電泳儀通電進入工作狀態(tài)后,禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內(nèi)取放東西,如需要應先斷電,以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端,以防漏電?! ?、儀器通電后,不要臨時增加或撥除輸出導線插頭,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險絲,但短路現(xiàn)象仍有可能導致儀器損壞。 3、由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同,電泳時所通過的電流量也不同,其泳動速度及泳至終點所需時間也不同,故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行?! ?、在總電流不超過儀器額定電流時(zui大電流范圍),可以多槽關(guān)聯(lián)使用,但要注意不能超載,否則容易影響儀器壽命?! ?、某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時,允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機,但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負載再開機,否則電壓表指針將大幅度跳動,容易造成不必要的人為機器損壞。 6、使用過程中發(fā)現(xiàn)異?,F(xiàn)象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電源,進行檢修,以免發(fā)生意外事故。
電泳槽的常見問題解決介紹
電泳槽時凝膠時間不對,那么通常膠在60min,1H內(nèi)凝;
如果凝的太慢,可能是TEMEN,APS劑量不夠或者失效。
APS應該現(xiàn)配現(xiàn)用,TEMED不穩(wěn)定,容易被氧化成黃色。
如果凝的太快,可能是APS和TEMED用量過多,此時膠太硬易裂,電泳時易燒膠。
紋理和托尾現(xiàn):
由于樣品溶解不佳引起的,克服的方法可以在加樣前離心,增加一些增溶輔助試劑如尿素。
蛋白帶過寬,與鄰近泳道的蛋白帶相連時由于加樣量太多,可以減少上樣量。
電泳時間比正常要長。
可能由于凝膠緩沖系統(tǒng)和電極緩沖系統(tǒng)的PH選擇錯誤,即緩沖系統(tǒng)的PH和被分離物質(zhì)的等電點差別太小,或緩沖系統(tǒng)的離子強度太高。
指示劑成微笑符號(指示劑前沿呈現(xiàn)向上的曲線形),說明凝膠的不均勻冷卻,中間部分冷卻不好,導致分子有不同的遷移率所致。
指示劑成哭臉符號(指示劑前沿呈現(xiàn)向下的曲線形),由于電泳槽的裝置不合適,尤其是凝膠和玻璃板組成的“三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不**。