【導(dǎo)讀】液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表

液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。下面介紹一下反相色譜柱的選擇和使用：

一、反相色譜柱的選擇

1.柱子的PH值使用范圍

反相柱優(yōu)點(diǎn)是固定相穩(wěn)定，應(yīng)用廣泛，可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料，使用時(shí)**要注意流動(dòng)相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動(dòng)相的PH值小于2時(shí)，會(huì)導(dǎo)致鍵合相的水解;當(dāng)PH值大于7時(shí)硅膠易溶解;經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況，色譜柱人口處會(huì)塌陷。同樣填料各種不同牌號(hào)的色譜柱不盡相同。如果流動(dòng)相PH較高或經(jīng)常使用緩沖液時(shí)，建議選擇PH范圍大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH2-9或Zorbax的PH2-11.5的柱子。

2.填料的端基封尾（或稱封口）

把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進(jìn)行端基封尾，可改善對(duì)極性化合物的吸附或拖尾;含碳量**了，有利于不易保留化合物的分離;填料穩(wěn)定性好了，組分的保留時(shí)間重現(xiàn)性就好。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物，***好選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。

二、液相色譜柱的使用

色譜柱在使用前，***好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測(cè)試所使用的條件是***佳條件），只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。

1、樣品的前處理

a、***好使用流動(dòng)相溶解樣品。

b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。

2、流動(dòng)相的配制

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有**的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中）。

b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果;降低柱壓降，延長(zhǎng)泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）。

d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，***好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。

e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。

f、在流動(dòng)相配制好后，**要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流動(dòng)相流速的選擇

因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求***佳柱效，***好使用***佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。

當(dāng)選用***佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）。

注意：

a.含水流動(dòng)相***好在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜。***好加入疊氮化鈉，防止**生長(zhǎng)。

b.流動(dòng)相要求使用0.45μm濾膜過(guò)濾，除去微粒雜質(zhì)。

c.使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

三.色譜柱的維護(hù)

1.色譜柱的平衡

反相色譜柱由工廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請(qǐng)**確保您分析樣品所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來(lái)平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問(wèn)題方面獲得**的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)!操作步驟：

a.平衡開(kāi)始時(shí)將流速緩慢地提高，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡）

b.如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過(guò)渡"即每天分析開(kāi)始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡;分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。

2.色譜柱的再生

長(zhǎng)期使用的色譜柱，往往柱效會(huì)下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）?？梢詫?duì)色譜柱進(jìn)行再生，在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。

建議用來(lái)沖洗柱子的溶劑體積

色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積

125-4mm1.6ml30ml

250-4mm3.2ml60ml

250-10mm20ml400ml

選擇再生方法：

極性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色譜填料）的再生：

正庚烷→→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

非極性固定相（如反相色譜填料RP-18，RP-8，CN等）的再生：水→乙腈→（或異丙醇）→乙腈→水

注意：

a.在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液**流出稀硫酸可以用來(lái)清洗已污染的色譜柱，如果簡(jiǎn)單的用有機(jī)溶劑/水的處理不能夠**洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。

3.色譜柱的維護(hù)

a.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有**的溶解度）

b.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍

c.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化

d.流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理

e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中

f.氯化物的溶劑對(duì)其有**的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕

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相關(guān)熱詞：

等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,**液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓**器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀**材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。

　　【***** 使用手冊(cè)】氣相色譜操作條件的選擇，常常決定是否能夠達(dá)到分離的目的，而選擇試驗(yàn)條件的主要依據(jù)是范氏方程和分離度與各種色譜參數(shù)的關(guān)系式。氣相色譜柱分析條件的選擇主要包括柱溫、載氣種類和流速等的選擇。適當(dāng)?shù)姆治鰲l件，可以在較短的時(shí)間內(nèi)完成分析工作，并達(dá)到良好的定性定量目的。在日常工作中，如何進(jìn)行色譜柱分析條件的選擇呢？　　柱溫的選擇　　柱溫是影響分析時(shí)間和分離度的重要因素。選擇柱溫的依據(jù)是樣品的沸點(diǎn)范圍，固定液的配比，允許使用溫度，以及檢測(cè)器的靈敏度?！　≈鶞刂饕绊懛峙湎禂?shù)、容量因子以及組分在流動(dòng)相和固定相中的擴(kuò)散系數(shù)，從而影響分離度和分析時(shí)間。選擇溫柱的原則，一般是在使難分離物質(zhì)對(duì)達(dá)到要求的分離度條件下，盡可能采用低溫柱，其優(yōu)點(diǎn)是可以增加固定相的選擇性，降低組分在流動(dòng)相中的縱向擴(kuò)散，提高柱效，減少固定液的流失、延長(zhǎng)柱壽命和降低檢測(cè)器的本底?！　√岣咧鶞乜梢允贡Ａ魰r(shí)間減少，加快分析速度，使樣品中組分**流出，但是分離效果不好。降低柱溫，樣品有較大的分配系數(shù)，選擇性高，有利于分離。但溫度過(guò)低，容易引起峰形拖尾或前伸，并且分析時(shí)間長(zhǎng)?？筛鶕?jù)固定液的使用溫度極限和樣品組分沸點(diǎn)調(diào)節(jié)柱溫。　　對(duì)于高沸點(diǎn)混合物，在保證分離**的前提下，盡量降低柱溫?？稍诘陀诜治鑫锓悬c(diǎn)180℃～200℃的柱溫下進(jìn)行分析；對(duì)沸點(diǎn)不太高(200～300℃)的樣品，柱溫可選100℃以下；對(duì)于氣體、氣態(tài)烴等低沸點(diǎn)混合物，一般選擇室溫或50℃以下進(jìn)行分析。對(duì)于寬沸程樣品，需采用程序升溫法進(jìn)行分離，即柱溫按預(yù)先設(shè)定的程序隨時(shí)間成線性或非線性增加，從而獲得分離效果。　　載氣的選擇　　一般說(shuō)來(lái)，痕量分析或毛細(xì)管色譜的載氣純化程度，要高于常規(guī)分析。特別是電子捕獲、熱導(dǎo)池檢測(cè)器，載氣純度直接影響靈敏度和穩(wěn)定性，**要嚴(yán)格凈化?！　「鶕?jù)分析對(duì)象，對(duì)于色譜柱的類型，操作儀器的檔次和具體檢測(cè)器，若使用不合要求的低純度氣體，不良影響有以下幾種可能：　　a.樣品失真或消失：如H2O氣使氯硅樣品水解；　　b.色譜柱失效：H2O，CO2使分子篩柱失去活性，H2O氣使聚脂類固定液分解，O2使PEG固定液斷鏈；　　c.有時(shí)某些氣體雜質(zhì)和固定液相互作用而產(chǎn)生假峰；　　d.對(duì)柱保留特性的影響：如H2O對(duì)聚乙二醇等親水性固定液的保留指數(shù)會(huì)有所增加，載氣中氧含量過(guò)高時(shí)，無(wú)論是極性或是非極性固定液柱的保留特性，都會(huì)產(chǎn)生變化，使用時(shí)間越長(zhǎng)影響越大；　　e.檢測(cè)器：TCD：信噪比減小，無(wú)法調(diào)零，線性變窄，文獻(xiàn)中的校正因子不能使用，氧含量過(guò)大，使元件在高溫時(shí)加速老化，減少壽命；FID：特別是在Dt≤1×10-11/S下操作時(shí)，CH4等有機(jī)雜質(zhì)會(huì)使基流激增，噪聲加大不能進(jìn)行微量分析；　　f.在做程序升溫操作時(shí)，載氣中的某些雜質(zhì)，在低溫時(shí)保留在色譜柱中，當(dāng)柱溫升高時(shí)不但引起基線漂移，還可能在譜圖上出現(xiàn)比較寬的“假峰”；　　g.儀器影響：各類過(guò)濾器加速失效；調(diào)節(jié)閥(穩(wěn)壓閥，穩(wěn)流閥，針形閥) 被污染，氣阻堵塞，調(diào)節(jié)精度降低或失靈；氣路系統(tǒng)被污染，若要恢復(fù)儀器在高靈敏度情況下操作，有時(shí)要吹洗很長(zhǎng)時(shí)間(可能一周以上), 污染嚴(yán)重時(shí)有時(shí)再也無(wú)法恢復(fù)；對(duì)于FID，水蒸氣會(huì)影響分析結(jié)果，直至影響檢測(cè)器的壽命；對(duì)ECD和TCD的壽命明顯，這點(diǎn)應(yīng)引起用戶特別注意?！　≥d氣的壓力和流速　　載氣壓力對(duì)柱效率有直接的影響。如提高柱內(nèi)壓力，有助于提高柱效率。但只提高入口壓力，使流速加大且壓降太大時(shí)，反而會(huì)降低柱效率，因此也必須提高出口壓力。一般采用在柱后加裝適當(dāng)氣阻的方法來(lái)解決這一問(wèn)題?！　≥d氣流速主要影響分離效率和分析時(shí)間。為獲得高柱效，應(yīng)選用佳流速，但所需分析時(shí)間較長(zhǎng)。為縮短分析時(shí)間，一般選擇載氣速度要高于佳流速，此時(shí)柱效雖稍有下降，卻節(jié)省了很多分析的時(shí)間。常用的載氣速度流速為20～80mL/min?！　?duì)于FID 或FPD 檢測(cè)器，氫氣和空氣的比例是影響分離度和靈敏度的重要因素，只有反復(fù)試驗(yàn)，才能確定適合的比例。對(duì)于填充柱色譜柱，載氣流入方向要盡量與色譜柱內(nèi)固定相裝填方向一致，以減小壓差，提率?！　∵M(jìn)樣量的選擇　　進(jìn)樣量的多少直接影響譜帶的初始寬度。因此，只要檢測(cè)器的靈敏度足夠高，進(jìn)樣量越少，越有利于得到良好的分離。一般情況下，柱越長(zhǎng)，管徑越粗，組分的容量因子越大，則允許的進(jìn)樣量越多。一般氣體進(jìn)樣量在1～10mL，液體進(jìn)樣量在0.5～10μL 之間，可取得較好的分析效果。此外，進(jìn)樣速度要快，進(jìn)樣時(shí)間要短，以減少縱向擴(kuò)散，有利于提高柱效?！　饣瘻囟鹊倪x擇　　氣化溫度取決于樣品的揮發(fā)性、沸點(diǎn)范圍及進(jìn)樣量等因素。氣化溫度選擇不當(dāng)，會(huì)使柱效下降。通常氣化室的溫度選擇為樣品沸點(diǎn)或高于沸點(diǎn)，以保證樣品能瞬間氣化；但不要超過(guò)沸點(diǎn)50℃以上，以防止樣品分解?！　?duì)于一般的氣相色譜分析，氣化溫度比柱溫高10～50℃即可。但對(duì)于某些高沸點(diǎn)組分或熱穩(wěn)定性差的組分，在其沸點(diǎn)左右分析會(huì)產(chǎn)生分解現(xiàn)象。此時(shí)應(yīng)采取的措施是減少進(jìn)樣量，采用高靈敏度檢測(cè)器，氣化室溫度的選擇應(yīng)低于其沸點(diǎn)100～200℃?！　囊陨辖榻B的選擇原則可以看出，各種條件往往同時(shí)影響色譜柱的選擇性和效率，它們之間既密切聯(lián)系又互相制約。因此在實(shí)際分析中，要作綜合考慮，靈活地運(yùn)用這些原則，既要保證良好的選擇性，又要保證分離效率，合理地選擇佳色譜分析條件。

當(dāng)色譜柱使用一段時(shí)間以后，柱內(nèi)由于各種原因，滯留了一些高沸點(diǎn)組分或氧化物等，除柱效有所下降外，還可能出現(xiàn)基線波動(dòng)或“鬼峰”。為了去除污染物，使柱效和基線恢復(fù)到原來(lái)的狀態(tài)，稱為色譜柱的再生。色譜柱的再生和柱老化有**區(qū)別和不同，它是柱在使用一段時(shí)間柱性能下降，經(jīng)處理后盡量恢復(fù)到原來(lái)性能的過(guò)程。A、色譜柱在以下幾種情況必須再生處理a.使一段時(shí)間，柱效明顯下降；b.柱被污染，特別是在程序升溫時(shí)，基線漂移和噪聲超過(guò)容忍程度或出現(xiàn)“鬼峰”；c.柱頭塌陷，柱床短路或斷位(在玻璃柱中容易發(fā)現(xiàn))，而出現(xiàn)尖峰或雙重峰；d.峰形展寬，保留時(shí)間明顯變化；e.待分離組分和固定相表面非特異性相互作用，引起保留時(shí)間較短的峰拖尾或出現(xiàn)雙峰；B、毛細(xì)管柱再生的幾種方法a.用載氣將色譜柱污染物沖洗出來(lái)；b.將柱頭截去100mm 或更長(zhǎng)一些；c.若使用交聯(lián)的色譜柱，可在儀器上反復(fù)注射溶劑進(jìn)行沖洗。常用的溶劑依次為丙酮、甲苯、乙醇、氯仿和二氯甲烷，每次可進(jìn)樣5～10μL；d.交聯(lián)柱在儀器上沖洗無(wú)效時(shí)，可把柱拆下來(lái)用二氯甲烷或氯仿沖洗，溶劑用量視柱的污染程度而定，一般20mL 左右。C、色譜柱再生前應(yīng)注意的問(wèn)題當(dāng)分析出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，不能只考慮是柱問(wèn)題，而馬上進(jìn)行再生。除上述情況外，還應(yīng)考慮樣品處理、進(jìn)樣技術(shù)、操作有無(wú)失誤、數(shù)據(jù)處理參數(shù)有無(wú)改變等可能帶來(lái)的問(wèn)題。a.襯管、預(yù)柱和檢測(cè)器被污染也會(huì)引起基線不穩(wěn)定、出現(xiàn)“鬼峰”或裂解峰；b.新的注射墊也會(huì)引起基線漂移和出現(xiàn)“鬼峰”；c.襯管密封欠佳、柱安裝死體積或檢測(cè)器固有特性也會(huì)引起較早出現(xiàn)峰的拖尾；d.分析系統(tǒng)發(fā)生變化(如漏氣嚴(yán)重)也可能使保留時(shí)間突變；e.峰變寬，除柱效下降外也可能由柱外效應(yīng)引起；f.進(jìn)樣量太大也會(huì)引起峰變寬、拖尾或保留時(shí)間變短；g.色譜柱長(zhǎng)時(shí)間樣品過(guò)載，保留時(shí)間也會(huì)變小等。D、色譜柱再生時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題1.如前所述和色譜柱老化一樣，不是溫度越高越好，時(shí)間越長(zhǎng)越好；建議不要使用長(zhǎng)時(shí)間烘烤的方法，來(lái)處理受到污染的色譜柱，因?yàn)楹婵緯r(shí)，溫度會(huì)把污染的殘留物變成不能溶解的物質(zhì)，再用溶劑清洗也無(wú)濟(jì)于事；2.儀器在高靈敏度操作時(shí)，如：量程在1×10-11A/mV以下，痕量分析程序升溫過(guò)程中，溫度升到大于180℃后，基線明顯漂移是不可避免的；3.不同類型柱子，再生方法不同；4.樣品種類、組分、進(jìn)樣量不同或操作時(shí)間長(zhǎng)短不同，再生方法也不同；5.儀器本身?xiàng)l件如：氣源種類、純度、凈化條件、進(jìn)樣口結(jié)構(gòu)和操作檢測(cè)器不同，再生柱方法也有區(qū)別；6.高分子量組分污染色譜柱后，高溫再生時(shí)間長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致固定相的老化；使用交聯(lián)或鍵合柱***好用溶劑漂洗再生，漂洗溶劑流動(dòng)方向**要從柱出口注入。應(yīng)該注意，毛細(xì)管柱交聯(lián)鍵合率通常不到90%，因此會(huì)漂洗掉未化學(xué)結(jié)合的液相部分，所以保留時(shí)間和分離狀態(tài)會(huì)有所變化；7.對(duì)于難揮發(fā)物，碳化物是不能通過(guò)再生除去，對(duì)于填充柱***好使用帶襯管氣化室進(jìn)樣器，對(duì)于毛細(xì)管可通過(guò)把柱入口切去30～50cm的方法除去污物段。有條件的可以使用預(yù)柱，把不揮發(fā)的有機(jī)物、無(wú)機(jī)物和顆粒材料阻留在預(yù)柱中，需要時(shí)更換預(yù)柱；8.在某些情況下，色譜柱要在溫度極限附近使用，這時(shí)基線漂移和大噪聲已不可避免，柱的再生要求只能視情況而定；9.不是所有色譜柱通過(guò)再生均能恢復(fù)原來(lái)性能。