【導讀】一、流動相溶劑的選擇1.所選用的流動相溶劑要有**的化學穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應，其純度和化學特性必須滿足色譜過程的穩(wěn)定性和重復性的要求。2.

一、流動相溶劑的選擇

1.所選用的流動相溶劑要有**的化學穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應，其純度和化學特性必須滿足色譜過程的穩(wěn)定性和重復性的要求。

2.溶劑應當不干擾檢測器的工作，溶劑應與檢測器匹配，選擇不影響檢測器正常工作應選擇在測定波長范圍內(nèi)無吸收的流動相。

3.在制備分離中,溶劑應當易于除去,不干擾對分離組分的回收。

4.溶劑的粘度要小，保證合適的柱壓降。

5.從實用角度考慮，溶劑應當價格低廉，容易購得，使用**，純度要高。

二、流動相溶劑使用的注意事項

1.流動相溶劑應選擇HPLC的溶劑或依此為標準的溶劑。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣，**微粒和灰塵。在送液泵內(nèi)，為了防止雜物（固體）進入流路，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過，這會導致流路和柱子堵塞和污染。為此，建議常用0.45μm濾膜過濾。流動相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時，或壓力溫度變化時容易產(chǎn)生大量氣泡，會導致泵誤動作和輸液不暢，檢測器產(chǎn)生噪聲信號等。

2.流動相恢復到室溫后使用。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復到室溫前，基線水平很難穩(wěn)定，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機溶劑混合時，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務必注意。

3.做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水，水相流動相需經(jīng)常更換，防止長菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結(jié)果。

4.流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的

5.用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用后都要用水清洗流路，**禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時間。

6.若需要使用含鹽的流動相，使用前請過濾。并且使用該含鹽流動相前，色譜柱需先用低比例有機相（有機相含量應不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，以免流動相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

7.進行梯度實驗時要注意梯度變化過程中流動相的互溶性，避免因流動相不互溶而導致的緩沖鹽析出問題。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲存流動相后在接柱子。

8.在更換兩種互不相溶的流動相時，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相，然后在用正己烷做流動相時，**要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。

9.儀器在短期（兩三天）不用時，流路中可以是甲醇或水。儀器在長期不用時，流路中應用甲醇。

10.對于UV等檢測器用于高靈敏度檢測時，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動相溶劑，如甲醇、乙腈等。

11.當流動相溶劑為乙腈時，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常。這是由于乙氰的粘性大，導致泵的流速降低?？蛇m當提高流速使泵的壓力恢復正常即可。

12.流動相含有濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、二氯甲烷、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶劑，會對流路中的PEEK樹脂管路強度變成差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺。流動相含有鹵素離子的溶劑，如KCI、NaCI、NH4CI等。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時，分析完了后，應立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。

13.用于檢定梯度等性能時，短時間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問題的。

14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合，否則有可能會引起爆炸。

三、液相色譜流動相的貯存

流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。因許多有機溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器**要蓋嚴，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動相。

磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應盡量新鮮配制使用，不要貯存。如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，用前應重新濾過。容器應定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子無此現(xiàn)象。

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　　液相色譜儀適宜于分離、分析高沸點、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領域中針對這種精密而又運用廣泛的科學儀器，昨天我們講解了其常見的柱壓問題及解決方法，今天我們來聊一聊基線。HPLC常見的基線問題主要有基線漂移以及基線噪音?！　』€漂移　　線漂移基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問題。一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果用了緩沖溶液、緩沖鹽，或者在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，仍然發(fā)現(xiàn)基線漂移，原因可能有以下幾種：　　1、柱溫波動　　控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱?！　?、流通池被污染或有氣體　　用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(盡量斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。　　3、紫外燈能量不足　　更換新的紫外燈　　4、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。 檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑?！　』€噪音　　對于紫外檢測器, 氘燈光源打開后要預熱30 min以上, 基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測物無關(guān)的檢測器輸出信號的隨機擾動變化, 分短期噪聲和長期噪聲兩種?！　』€噪音(規(guī)則的)　　產(chǎn)生基線噪音的原因有：在流動相、檢測器或泵中有空氣;漏液;流動相混合不**;溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱);在同一條線上有其他電子設備;泵振動。　　了避免基線噪音,在正式進樣之前,需要對流動相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動;泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設備時斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正;泵振動時在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器?！　』€噪音(不規(guī)則的)　　(1) 漏液：檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液?！　?2) 流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動相的組成?！　?3) 流動相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動相。　　(4) 檢測器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正?！　?5) 系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強極性溶液清洗系統(tǒng);檢測器內(nèi)有氣泡,清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器?！　?6) 流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音) :用硝酸清洗流通池;　　(7) 檢測器燈能量時不足更換燈;　　(8) 色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱?！　?9) 流動相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,不建議使用泵的混合裝置。 【導讀】色譜柱在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件。正確使用和維護色譜柱尤為重要，使用不當就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。以下從幾個方面簡單

色譜柱在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件。正確使用和維護色譜柱尤為重要，使用不當就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。以下從幾個方面簡單介紹液相色譜柱在使用過程中應當著重注意的問題。

一、避免壓力和溫度的急劇變化

溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行，以保持色譜柱內(nèi)填料的穩(wěn)定性。

二、避免直接改變?nèi)軇┑慕M成

在需要改變檢測樣品溶液組成是，應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)?*是水，反之亦然。且在使用次洗脫能力強的洗脫液沖洗色譜柱時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。

三、避免色譜柱反沖

一般來說色譜柱不能反沖，只有色譜柱使用說明書上標明該柱可反沖才可以反沖除去留在柱頭上的雜質(zhì)。否則，反沖色譜柱的影響是迅速降低柱效。

四、避免流動相使用不當而破壞固定相

選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一段預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

五、禁止樣品未經(jīng)處理直接進入色譜柱

避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。

六、禁止將緩沖溶液長時間存放在色譜柱內(nèi)

保存色譜柱時應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。

七、禁止色譜柱未經(jīng)處理直接封存

色譜柱使用完成之后須使用相宜溶劑進行清潔處理，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡；當采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應用無鹽流動相沖洗；含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸；裝在液相色譜儀上的色譜柱如不經(jīng)常使用，應每隔4-5天開機沖洗15分鐘。

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