?液相色譜柱的使用注意事項(xiàng)：流動(dòng)相和樣品處理

1. 色譜柱使用前注意事項(xiàng)：

色譜柱的儲(chǔ)存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，**要注意色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。

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2. 流動(dòng)相：

1）在進(jìn)行樣品檢測(cè)前，至少使用20倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡。流動(dòng)相**要使用色譜級(jí)別的溶劑。如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免**產(chǎn)生。

　　2）流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過(guò)濾,**流動(dòng)相中顆粒對(duì)色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應(yīng)重新過(guò)濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5％的有機(jī)溶劑沖洗色譜柱，同時(shí)可以達(dá)到對(duì)緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。

　　3）流動(dòng)相需脫氣后使用，可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測(cè)器的工作不正常。如果測(cè)試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區(qū)別，應(yīng)該使用過(guò)度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大或流動(dòng)相緩沖鹽結(jié)晶造成對(duì)色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長(zhǎng)的平衡時(shí)間。

4）流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水*好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。

5）以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDSC18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并**置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。

6）流動(dòng)相PH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。一旦造成這種情況，很難恢復(fù)。

　　7）色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得*佳分離效果，使用時(shí)請(qǐng)不要超過(guò)200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會(huì)造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外*高操作溫度不要超過(guò)60℃

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3. 樣品：

　　1）樣品應(yīng)當(dāng)盡可能溶解在能與流動(dòng)相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強(qiáng)溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。

　　2）樣品溶液在進(jìn)樣前應(yīng)使用針頭式過(guò)濾器對(duì)樣品預(yù)先過(guò)濾。頻繁改變流動(dòng)相組成，會(huì)加速降低柱效。

3）樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱（SPE）對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。

日常中經(jīng)常會(huì)遇到液相色譜儀使用過(guò)程中冒出氣泡，一般是由于溫度上升，壓力下降造成的。

溫度上升或柱溫上升，當(dāng)接近試劑沸點(diǎn)時(shí)，試劑汽化產(chǎn)生氣泡，試劑中已含微小氣泡，因加熱變大而產(chǎn)生氣泡。壓力下降產(chǎn)生氣泡，流動(dòng)相中一直包含微小氣泡，無(wú)論超聲過(guò)濾，均不能池底去掉它，那么當(dāng)壓力下降時(shí)，微小氣泡將長(zhǎng)大，且多個(gè)小氣泡易聚集成大氣泡，而影響正常實(shí)驗(yàn)。

氣泡產(chǎn)生原因分析處理：

1、泵頭：泵頭是壓力變化***劇烈的地方，也是***易產(chǎn)生氣泡的地方，泵頭靠負(fù)壓而吸液，而負(fù)壓必然使流動(dòng)相中的小氣泡長(zhǎng)大，當(dāng)泵腔變正壓時(shí)，已長(zhǎng)大的氣泡未必能**變小流入后續(xù)液路，則泵腔內(nèi)將積存氣泡，從而影響吸液精度，鑒于此，泵頭上專門設(shè)計(jì)了排氣閥，便于泵頭排氣，觀察柱壓穩(wěn)定了說(shuō)明泵頭排氣成功。

2、吸液白管長(zhǎng)氣泡。

a、吸液白管接觸空氣部位漏氣，產(chǎn)生可見氣泡，吸液白管是常壓和負(fù)壓交臂變化部位，其漏表現(xiàn)為大氣進(jìn)入白管內(nèi)，而不易見到管內(nèi)液體漏出。

處理方法：更換白管。

b、濾頭堵：濾頭堵使得液體流入濾頭的速度下降，泵強(qiáng)制吸液而產(chǎn)生真空氣泡。

判斷：拔掉濾頭不再長(zhǎng)氣泡則是濾頭堵。

處理：A、30%硝酸水液超洗濾頭，20分鐘左右。

B、水超洗濾頭，注意換水多超幾次。

c、流動(dòng)相汽化產(chǎn)生氣泡。

尤其是夏天室溫高，沸點(diǎn)低的試劑易汽化，比如：乙酸，乙mi，氨水，石油醚等易于汽化。

處理：超聲，降室溫。

液相色譜速率理論方程式

　　在范第姆特方程模型基礎(chǔ)上，根據(jù)液相色譜的特點(diǎn)作了某些修正，得到如下幾種液相色譜速率理論方程式?！　?、**液相色譜速率理論方程式：

　　其中渦流擴(kuò)散項(xiàng)：

　　分子擴(kuò)散項(xiàng)：

　　傳質(zhì)阻力項(xiàng)：

　　其中包括：稱為流動(dòng)的流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力系數(shù)，稱為滯留的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力系數(shù)，稱為固定相中的傳質(zhì)阻力系數(shù)?！　?*液相色譜速率理論方程詳細(xì)表達(dá)式：

　　式中，　　d_p——色譜柱填料平均粒徑；　　d_f——固定相有效液膜厚度；　　U——流動(dòng)相平均流速；　　D_m——組分分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)；　　D_s——組分分子在固定相中的擴(kuò)散系數(shù)；　　w_m——由色譜柱和填充的性質(zhì)所決定的系數(shù)；　　w_s——與容量因子k有關(guān)的系數(shù)；　　w_sm——與顆粒微孔中被流動(dòng)相所占據(jù)部分的分?jǐn)?shù)以及容量因子k有關(guān)的系數(shù)。其余符號(hào)含義同前面。　　從上式中可以看出，液相色譜和氣象色譜的速率方程式基本一致，主要區(qū)別在于液相色譜中影響柱效的主要因素是傳質(zhì)阻力項(xiàng)，而份子擴(kuò)散項(xiàng)對(duì)柱效的影響不像氣相色譜那樣明顯。

　　2.吉丁斯修正速率理論方程式：　　吉丁斯認(rèn)為流動(dòng)相流速對(duì)渦流擴(kuò)散項(xiàng)影響較大，對(duì)范第姆特方程修正如下：

　　式中為渦流擴(kuò)散項(xiàng)，相當(dāng)于上式的含義。